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mengfei2050

铜虫 (正式写手)

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[求助] SDS-PAGE 我的样品没有跑出条带，请教高手！谢谢！

我从sigma买的脂肪酶pfl，昨天做了SDS-PAGE,电泳的结果是marker和其他人的发酵液提取的蛋白都有条带，就我的样一条也没跑出来。
我对样品的处理方法是：
用缓冲溶液配制酶的溶液，酶浓度0.001--5 mg/mL一共五六个浓度。
上样的时候直接10uL酶溶液加10uL巯基乙醇混合。
求原因。

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comeon

1楼 2011-07-16 11:47:56

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tomorrowhl

新虫 (初入文坛)

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我用细菌胞外产物跑PAGE，要不是没有条带，要不是模糊的条带，maker和样品的泳道挨着就会被及变形，样品的泳道很宽，差不多是两个用到那么款。用考马斯亮蓝测定蛋白质含量为1.78mg/ml。在电泳时会看到有黄色物质从样品泳道中析出。请各位高手指点迷津，小女子不胜感激啊！！！！
我的浓缩胶浓度为12，实验室其他人和我同时跑都能跑出清晰的条带

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6楼2012-05-15 16:04:15

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cxj.nt

金虫 (正式写手)

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【答案】应助回帖

★ ★
amisking(金币+2): 鼓励应助 2011-07-16 20:28:08

应该先配上样缓冲液吧，5ml的5×SDS-PAGE的配方：1mol/l Tirs-HCl(PH6.8) 1.25ml，SDS 0.5g，甘油 2.5ml，溴酚兰 25mg，加去离子水溶解定容至5ml，每份500微升分装后室温保存，使用前将25微升的2-ME加到每小分中。
样品跟上样缓冲液按4:1混合后，沸水煮5min再上样

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2楼2011-07-16 15:39:41

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