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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » SDS-PAGE 我的样品没有跑出条带，请教高手！谢谢！
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mengfei2050

铜虫 (正式写手)

[求助] SDS-PAGE 我的样品没有跑出条带，请教高手！谢谢！

我从sigma买的脂肪酶pfl，昨天做了SDS-PAGE,电泳的结果是marker和其他人的发酵液提取的蛋白都有条带，就我的样一条也没跑出来。
我对样品的处理方法是：
用缓冲溶液配制酶的溶液，酶浓度0.001--5 mg/mL一共五六个浓度。
上样的时候直接10uL酶溶液加10uL巯基乙醇混合。
求原因。
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comeon
1楼 2011-07-16 11:47:56
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子曰包子好吃

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
amisking(金币+2): 鼓励应助 2011-07-16 20:28:14
mengfei2050(金币+3): 2011-07-18 08:44:12
你的蛋白变性了没啊？先跟上样缓冲液混匀 煮沸5min 或者97℃ 5min 变性
-20℃或-80℃保存 下次上样前95℃ 5秒 再充分混匀上样
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3楼2011-07-16 15:49:40
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cxj.nt

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
amisking(金币+2): 鼓励应助 2011-07-16 20:28:08
应该先配上样缓冲液吧，5ml的5×SDS-PAGE的配方：1mol/l  Tirs-HCl(PH6.8) 1.25ml，SDS  0.5g，甘油   2.5ml，溴酚兰 25mg，加去离子水溶解定容至5ml，每份500微升分装后室温保存，使用前将25微升的2-ME加到每小分中。
样品跟上样缓冲液按4:1混合后，沸水煮5min再上样
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2楼2011-07-16 15:39:41
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mengfei2050

铜虫 (正式写手)
我的样品没有煮沸，不煮沸有什么影响吗？
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comeon
4楼2011-07-16 16:14:57
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cxj.nt

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

mengfei2050(金币+7): 2011-07-18 08:44:00
煮沸是变性的，你是不是样品放时间长了？我以前也有煮了过几天在跑就跑不出来的
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5楼2011-07-16 17:15:18
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