应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » SDS-PAGE 我的样品没有跑出条带，请教高手！谢谢！
81/1返回列表
查看: 1875  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

mengfei2050

铜虫 (正式写手)

[求助] SDS-PAGE 我的样品没有跑出条带，请教高手！谢谢！

我从sigma买的脂肪酶pfl，昨天做了SDS-PAGE,电泳的结果是marker和其他人的发酵液提取的蛋白都有条带，就我的样一条也没跑出来。
我对样品的处理方法是：
用缓冲溶液配制酶的溶液，酶浓度0.001--5 mg/mL一共五六个浓度。
上样的时候直接10uL酶溶液加10uL巯基乙醇混合。
求原因。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
comeon
1楼 2011-07-16 11:47:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cxj.nt

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
amisking(金币+2): 鼓励应助 2011-07-16 20:28:08
应该先配上样缓冲液吧，5ml的5×SDS-PAGE的配方：1mol/l  Tirs-HCl(PH6.8) 1.25ml，SDS  0.5g，甘油   2.5ml，溴酚兰 25mg，加去离子水溶解定容至5ml，每份500微升分装后室温保存，使用前将25微升的2-ME加到每小分中。
样品跟上样缓冲液按4:1混合后，沸水煮5min再上样
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2011-07-16 15:39:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

子曰包子好吃

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
amisking(金币+2): 鼓励应助 2011-07-16 20:28:14
mengfei2050(金币+3): 2011-07-18 08:44:12
你的蛋白变性了没啊？先跟上样缓冲液混匀 煮沸5min 或者97℃ 5min 变性
-20℃或-80℃保存 下次上样前95℃ 5秒 再充分混匀上样
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2011-07-16 15:49:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mengfei2050

铜虫 (正式写手)
我的样品没有煮沸，不煮沸有什么影响吗？
赞一下 回复此楼
comeon
4楼2011-07-16 16:14:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cxj.nt

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

mengfei2050(金币+7): 2011-07-18 08:44:00
煮沸是变性的，你是不是样品放时间长了？我以前也有煮了过几天在跑就跑不出来的
赞一下 回复此楼
5楼2011-07-16 17:15:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tomorrowhl

新虫 (初入文坛)
我用细菌胞外产物跑PAGE，要不是没有条带，要不是模糊的条带，maker和样品的泳道挨着就会被及变形，样品的泳道很宽，差不多是两个用到那么款。用考马斯亮蓝测定蛋白质含量为1.78mg/ml。在电泳时会看到有黄色物质从样品泳道中析出。请各位高手指点迷津，小女子不胜感激啊！！！！
我的浓缩胶浓度为12，实验室其他人和我同时跑都能跑出清晰的条带
赞一下 回复此楼
6楼2012-05-15 16:04:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chunqizzm

银虫 (小有名气)
引用回帖:
1615185楼: Originally posted by tomorrowhl at 2012-05-15 16:04:15:
我用细菌胞外产物跑PAGE，要不是没有条带，要不是模糊的条带，maker和样品的泳道挨着就会被及变形，样品的泳道很宽，差不多是两个用到那么款。用考马斯亮蓝测定蛋白质含量为1.78mg/ml。在电泳时会看到有黄色物质从 ...

最好是上传一下图片！
赞一下 回复此楼
7楼2012-05-15 21:50:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chunqizzm

银虫 (小有名气)
引用回帖:
1615185楼: Originally posted by tomorrowhl at 2012-05-15 16:04:15:
我用细菌胞外产物跑PAGE，要不是没有条带，要不是模糊的条带，maker和样品的泳道挨着就会被及变形，样品的泳道很宽，差不多是两个用到那么款。用考马斯亮蓝测定蛋白质含量为1.78mg/ml。在电泳时会看到有黄色物质从 ...

有一种可能是样品pH值的问题。没见着图我真不知道能怎么说，我也没多少经验。希望有大神解答。最好是上传图片看看，毕竟电泳最后得到的就是图。
赞一下 回复此楼
8楼2012-05-15 21:53:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 mengfei2050 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿 西北大学 ，070300化学学硕，总分287，双非一本，求调剂。 +3 晨昏线与星海 2026-03-19 3/150 2026-03-19 13:36 by houyaoxu
[考研] 346求调剂[0856] +3 WayneLim327 2026-03-16 6/300 2026-03-19 11:21 by WayneLim327
[考研] 一志愿吉林大学材料学硕321求调剂 +6 Ymlll 2026-03-18 9/450 2026-03-19 10:28 by 星空星月
[考研] 0703化学 305求调剂 +4 FY_yy 2026-03-14 4/200 2026-03-19 05:54 by anny19840123
[考研] 085601专硕，总分342求调剂，地区不限 +5 share_joy 2026-03-16 5/250 2026-03-18 14:48 by haxia
[考研] 0854可跨调剂，一作一项核心论文五项专利，省、国级证书40+数一英一287 +8 小李0854 2026-03-16 8/400 2026-03-18 14:35 by 搏击518
[考研] 299求调剂 +5 △小透明* 2026-03-17 5/250 2026-03-18 11:49 by 尽舜尧1
[考研] 0703化学336分求调剂 +6 zbzihdhd 2026-03-15 7/350 2026-03-18 09:53 by zhukairuo
[考研] [导师推荐]西南科技大学国防/材料导师推荐 +3 尖角小荷 2026-03-16 6/300 2026-03-16 23:21 by 尖角小荷
[考研] 318求调剂 +3 Yanyali 2026-03-15 3/150 2026-03-16 16:41 by houyaoxu
[考研] 中科院材料273求调剂 +4 yzydy 2026-03-15 4/200 2026-03-16 15:59 by Gaodh_82
[考研] 22408总分284求调剂 +3 InAspic 2026-03-13 3/150 2026-03-15 11:10 by zhq0425
[考研] 080500，材料学硕302分求调剂学校 +4 初识可乐 2026-03-14 5/250 2026-03-14 21:08 by peike
[考研] 本科南京大学一志愿川大药学327 +3 麦田耕者 2026-03-14 3/150 2026-03-14 20:04 by 外星文明
[考研] 中科大材料专硕319求调剂 +3 孟鑫材料 2026-03-13 3/150 2026-03-14 18:10 by houyaoxu
[基金申请] 现在如何回避去年的某一个专家，不知道名字 +3 zk200107 2026-03-12 6/300 2026-03-14 17:13 by zk200107
[考研] 复试调剂 +3 呼呼？~+123456 2026-03-14 3/150 2026-03-14 16:53 by WTUChen
[考研] 学硕285求调剂 +13 Wisjxn 2026-03-12 46/2300 2026-03-14 10:33 by JourneyLucky
[考研] 266求调剂 +4 学员97LZgn 2026-03-13 4/200 2026-03-14 08:37 by zhukairuo
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +3 崔wj 2026-03-12 4/200 2026-03-12 19:33 by 求调剂zz
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭