24小时热门版块排行榜    

查看: 2070  |  回复: 13
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

piaoyuaaa

金虫 (小有名气)

[求助] DGGE胶回收问题

DGGE胶怎样回收?跑一次DGGE,回收胶PCR后可以测序吗?一般用常规测序还是克隆测序?还有我用的是巢式PCR,测序时的引物该用目的片段的引物吗?还是两对引物都要?
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

piaoyuaaa

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by xiadongliang at 2011-07-15 10:37:58:
不行。
DGGE的条带是一定要克隆测序的。不然测序90%都得失败。

克隆测序的话,我就跑了一次DGGE,而且我的PCR产物不纯,就是在紧挨着目的条带上方有个杂带,克隆测序行吗?还是需要跑两次DGGE,把PCR产物纯化好才能克隆测序?谢谢
9楼2011-07-15 10:56:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 14 个回答

xiadongliang

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
amisking(金币+2): 鼓励应助 2011-07-12 21:00:23
piaoyuaaa(金币+2): 2011-07-13 15:09:29
回收后需要采用没有GC夹子的引物进行PCR扩增,产物克隆后测序。
克隆后采用载体引物测序就可以了
2楼2011-07-12 13:38:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

piaoyuaaa

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by xiadongliang at 2011-07-12 13:38:32:
回收后需要采用没有GC夹子的引物进行PCR扩增,产物克隆后测序。
克隆后采用载体引物测序就可以了

我回收了一次DGGE胶,然后用没有带夹子的引物做PCR,扩出来的目的条带很亮,但紧挨着目的条带上方有不很亮的条带,若不仔细看就是和目的片段连到一起了,不知道什么原因
http://good.gd/1394954.htm
3楼2011-07-13 15:09:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiadongliang

金虫 (正式写手)

你的是什么样本啊?不会是植物的吧?
不用管上面这个带,直接克隆后去阳性克隆就可以了。两个片段离得很远,筛选阳性克隆时能够区分开。
4楼2011-07-14 08:38:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 289材料与化工(085600)B区求调剂 +3 这么名字咋样 2026-03-22 4/200 2026-03-22 17:56 by 云民大李老师
[考研] 一志愿北京化工大学 070300 学硕 336分 求调剂 +3 vv迷 2026-03-22 3/150 2026-03-22 15:18 by 杨杨杨紫
[考研] 318求调剂 +4 plum李子 2026-03-21 7/350 2026-03-22 14:17 by ColorlessPI
[考研] 招08考数学 +3 laoshidan 2026-03-20 7/350 2026-03-22 12:54 by 在风落中
[考研] 初试 317 +7 半拉月丙 2026-03-20 7/350 2026-03-21 22:26 by peike
[考研] 278求调剂 +9 烟火先于春 2026-03-17 9/450 2026-03-21 17:47 by 学员8dgXkO
[考研] 336求调剂 +5 rmc8866 2026-03-21 5/250 2026-03-21 17:24 by 学员8dgXkO
[考研] 306求0703调剂一志愿华中师范 +5 纸鱼ly 2026-03-21 5/250 2026-03-21 17:11 by 学员8dgXkO
[考研] 268求调剂 +9 简单点0 2026-03-17 9/450 2026-03-21 15:37 by lature00
[考研] 初始318分求调剂(有工作经验) +3 1911236844 2026-03-17 3/150 2026-03-21 02:33 by JourneyLucky
[考研] 化学求调剂 +4 临泽境llllll 2026-03-17 5/250 2026-03-21 02:23 by JourneyLucky
[考研] 一志愿中国石油大学(华东) 本科齐鲁工业大学 +3 石能伟 2026-03-17 3/150 2026-03-21 02:22 by JourneyLucky
[考研] 294求调剂材料与化工专硕 +15 陌の森林 2026-03-18 15/750 2026-03-20 23:28 by JourneyLucky
[考研] 考研调剂求学校推荐 +3 伯乐29 2026-03-18 5/250 2026-03-20 22:59 by JourneyLucky
[考研] 085600材料与化工 +8 安全上岸! 2026-03-16 8/400 2026-03-20 22:13 by luoyongfeng
[考研] 一志愿苏州大学材料求调剂,总分315(英一) +5 sbdksD 2026-03-19 5/250 2026-03-20 22:10 by luoyongfeng
[考研] 求调剂一志愿南京航空航天大学289分 +3 @taotao 2026-03-19 3/150 2026-03-20 21:34 by JourneyLucky
[考研] 0854可跨调剂,一作一项核心论文五项专利,省、国级证书40+数一英一287 +8 小李0854 2026-03-16 8/400 2026-03-18 14:35 by 搏击518
[考研] 277调剂 +5 自由煎饼果子 2026-03-16 6/300 2026-03-17 19:26 by 李leezz
[考研] 考研调剂 +3 淇ya_~ 2026-03-17 5/250 2026-03-17 09:25 by Winj1e
信息提示
请填处理意见