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PAOs

木虫 (小有名气)

[求助] DGGE之后的PCR P不出来了

大家好,我做全菌的DGGE后的PCR,用的50微升的体系:
968F:2微升
1392R:2微升
DNTP(mix):2微升
10*buffer:5微升
Mg离子:3微升
Taq酶:0.3微升

程序:94℃:5min
          94℃:30s
          55℃:30s
         72℃:30s
        72℃:10min

第一轮以溶解的DGGE胶中DNA为模板,1微升
http://good.gd/1388625.htm
http://good.gd/1388633.htm
第二轮以第一轮PCR产物为模板,1微升。
http://good.gd/1388636.htm

第一轮还好,有点条带,可第二轮不知道怎的整条泳道都是亮的。我不是很懂分子生物学,请大家支支招,万分感激。
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zhangxianqin

金虫 (小有名气)


西瓜(金币+1): 欢迎交流 2011-08-16 11:40:40
扩一次就可以了。第二次是因为你第一次扩出来后杂片段也多,出现了很多的模板,在扩出来当然就整个泳道都是亮的了。
6楼2011-08-16 10:15:59
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