| 查看: 1209 | 回复: 3 | ||||
| 本帖产生 1 个 BioEPI ，点击这里进行查看 | ||||
[交流]
蛋白过纤维素柱的过程
|
||||
| 请问，蛋白过纤维素柱怎么确定纤维素的用量？怎么做小试来确定梯度？玻璃柱过柱子之前怎么洗？越详细越好，新手不懂，感谢各位 |
回复此楼» 猜你喜欢
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
多糖酶解 HPLC 去酶
已经有13人回复
- 关于多糖的提取和纯化
已经有13人回复
- β-糖苷酶表达可溶性蛋白很多，怎么就是没有活性
已经有24人回复
- 羧甲基纤维素和DEAE纤维素分离蛋白有什么区别？
已经有4人回复
- 【求助/交流】如何高度纯化蛋白，急急急
已经有15人回复
- 【求助】如何选择手性分析柱
已经有4人回复
» 抢金币啦！回帖就可以得到:
-
苏州国家实验室---南京大学联合培养博士招生（2026秋季入学）
+5/345
-
上海交通大学张万斌院士团队招聘科研助理和博士候选人
+1/87
-
湖北文理学院，材料，化学，环境，机械，电子，工程等专业均可报名调剂！
+3/83
-
硕士招生 吉林化工大学 功能多孔材料课题组招考研学生1-2名
+1/37
-
坐标河北邢台，征女友
+1/36
-
材料与化工专业还有大量指标，欢迎大家调剂，调剂系统已经开放
+1/24
-
佛山大学动物科技学院2026年硕士研究生招生调剂公告（第三批）
+1/20
-
浙江理工大学蒋仲庆教授课题组招收物理或者材料背景研究生（调剂1名）
+1/16
-
上海交通大学材料成形（塑性加工）常年招聘硕士研究生、博士研究生和博士后
+1/10
-
稀土发光分析｜核壳结构｜寿命拟合
+1/10
-
湖南理工大学化学化工学院的化学和化学工程与技术专业调剂
+1/9
-
煤炭科学研究总院矿山新材料研究院员工博士后招聘
+1/8
-
省重点实验室招收07专业调剂生，海洋生物专业名额充足
+1/7
-
山东大学集成电路学院招博士了
+1/6
-
深圳理工大学研究助理教授招聘-先进拉曼技术课题组
+1/5
-
基金祈福
+1/5
-
申请临床医学博士、医学博士
+1/4
-
东北师范大学化学学院无机化学专业招收博士一名
+1/2
-
郑州大学物理学院倪佩楠教授课题组诚邀博士后、青年教师及副教授加盟
+1/2
-
找好工作来我这-广东唯一石化院校——资源与环境专硕招生
+1/1
冼亮淀粉酶
专家顾问 (知名作家)
-
专家经验: +248 - BioEPI: 73
- 应助: 257 (大学生)
- 贵宾: 0.272
- 金币: 19526.4
- 帖子: 6591
- 在线: 2781.2小时
- 虫号: 856414
2楼2011-07-08 02:07:09
3楼2011-07-08 11:33:48
冼亮淀粉酶
专家顾问 (知名作家)
-
专家经验: +248 - BioEPI: 73
- 应助: 257 (大学生)
- 贵宾: 0.272
- 金币: 19526.4
- 帖子: 6591
- 在线: 2781.2小时
- 虫号: 856414
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
amisking(金币+6, EPI+1): 鼓励应助 2011-07-08 20:07:43
暖木warm(金币+3): 非常感谢 2011-07-08 21:57:34
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
amisking(金币+6, EPI+1): 鼓励应助 2011-07-08 20:07:43
暖木warm(金币+3): 非常感谢 2011-07-08 21:57:34
|
如果是填料，说明书可能是没有了。我这里有DEAE的说明书，我也用过这个层析柱。 空柱是要洗干净才行的，至于装柱，最好还是有连接器，不然装不实，如果有空隙效果就会差一点了。你说的玻璃柱也不一定要玻璃柱，你用其它材质的也行，如果是玻璃，用氢氧化钠洗的时候会有轻微的反应生成硅酸钠，所以材质最好选择能耐受高pH值的。 DEAE短时间内能耐受pH1-14，但要注意是短时间，最多冲洗2个柱床体积就要改变回去，最好是中性的。工作时候pH2-9，但考虑到蛋白质过酸过碱会变性，所以最好是5-8，具体是多少还要看你的蛋白质而定，最好是看看各个pH值下你的蛋白质的半寿期。 填料的用量我觉得还是首先要看看你有多少填料，填料足够了，你装多大都行。至于摸索条件之类的，你就装小的，5毫升就行，甚至1毫升也可以，这样就能很快冲洗完一个柱床体积了。因为一倍柱床体积是不足以冲洗完全的，所以每做一个浓度都应该冲洗多于一倍，我用5倍，柱床体积越小就越节省时间。 至于摸索完洗脱条件之后，就要用来分离制备样品，这时候用柱床体积大的，有利于结合较多的蛋白质，一次制备较多的蛋白质。你可以装个20毫升的，随你了。 自己装的层析柱如果接头合适，那也能用蛋白质纯化仪的，那就不用装小柱，直接装大柱了，洗脱条件也不用摸索了，直接走0-100%氯化钠连续线性梯度。 |
4楼2011-07-08 19:06:41
