24小时热门版块排行榜    

查看: 2614  |  回复: 8
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

zqt123_1981

木虫 (小有名气)

[求助] 已知全长基因怎样克隆并构建表达载体

目的基因在Genbank有mRNA全长序列,我想把它克隆出来构建表达载体,1 atggctgtag cggaggaact gagaaacgct ccacgtgcaa agggtccggc caccatccta。。。。。。
1141 actgttgtgc tgcatagcat tcctacaatt acaaattaa。请问怎样设计引物克隆全长??pGM-T载体的话还用添加酶切位点与保护碱基吗?有同仁说直接从头尾各选一定长度的碱基就可以吗?怎样验证啊
回复此楼
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangdandelia

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

zqt123_1981(金币+1): 2011-07-13 16:37:49
将片段两边用Klenow片段补平,然后进行片段末端的磷酸化。同时选择要用的载体,进行酶切成线性,去磷酸化,与你的片段平末端连接,导入感受态,用你的载体的抗性选择,得到的菌就应该是你要的载体与片段的连接产物。不知道这个方法对你有没有帮助。
9楼2011-07-09 17:44:20
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

yesucao

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

zqt123_1981(金币+1): 2011-07-13 16:38:26
用oligo设计软件,你要想真的扩增它的全长的话确实是取头和尾的一定碱基,酶切位点和保护碱基肯定是要的,你不妨先学学oligo软件,或者是DNAman也是可以的,不过前者更好一些,还有就是学学引物设计原则。
2楼2011-07-07 20:49:10
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yesucao

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

zqt123_1981(金币+1): 2011-07-13 16:38:21
本来还想着给你一篇关于PCR引物设计及软件使用技巧的,怎么没看到上传的字样呢???
3楼2011-07-07 20:51:26
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

【答案】应助回帖

zqt123_1981(金币+1): 2011-07-13 16:38:15
1 引物可以直接取头尾,因为已经是一个完整的CDS了。
2 你先做克隆的话,如果T载上的酶切位点可用,就不需要添加酶切位点和保护碱基了。
Thank-you,so-blue.
4楼2011-07-08 08:43:07
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 266求调剂 +5 阳阳哇塞 2026-03-14 9/450 2026-03-18 15:05 by stone_128
[考研] 314求调剂 +8 无懈可击的巨人 2026-03-12 8/400 2026-03-18 14:50 by haxia
[考研] 297求调剂 +8 戏精丹丹丹 2026-03-17 8/400 2026-03-18 14:30 by laoshidan
[考研] 能源材料化学课题组招收硕士研究生8-10名 +4 脱颖而出 2026-03-16 9/450 2026-03-18 14:13 by 脱颖而出
[考研] 一志愿985,本科211,0817化学工程与技术319求调剂 +6 Liwangman 2026-03-15 6/300 2026-03-18 13:21 by 尽舜尧1
[考研] 一志愿天津大学化学工艺专业(081702)315分求调剂 +9 yangfz 2026-03-17 9/450 2026-03-18 12:38 by 尽舜尧1
[考研] 277调剂 +5 自由煎饼果子 2026-03-16 6/300 2026-03-17 19:26 by 李leezz
[考研] 267一志愿南京工业大学0817化工求调剂 +6 SUICHILD 2026-03-12 6/300 2026-03-17 09:24 by 雾散后相遇lc
[考研] 274求调剂 +5 时间点 2026-03-13 5/250 2026-03-17 07:34 by 热情沙漠
[考研] 11408 一志愿西电,277分求调剂 +3 zhouzhen654 2026-03-16 3/150 2026-03-17 07:03 by laoshidan
[考研] 304求调剂 +4 ahbd 2026-03-14 4/200 2026-03-16 16:48 by 我的船我的海
[考研] 070303一志愿西北大学学硕310找调剂 +5 d如愿上岸 2026-03-12 8/400 2026-03-16 15:19 by peike
[考研] 复试调剂 +4 z1z2z3879 2026-03-14 5/250 2026-03-14 16:30 by JourneyLucky
[考研] 材料080500调剂求收留 +3 一颗meteor 2026-03-13 3/150 2026-03-14 10:54 by peike
[考研] 308 085701 四六级已过求调剂 +7 温乔乔乔乔 2026-03-12 14/700 2026-03-14 10:49 by JourneyLucky
[考研] 304求调剂 +6 Mochaaaa 2026-03-12 7/350 2026-03-13 22:18 by 星空星月
[考研] 310求调剂 +3 【上上签】 2026-03-11 3/150 2026-03-13 16:16 by JourneyLucky
[考研] 工科278分求调剂 +5 周慢热啊 2026-03-12 7/350 2026-03-13 15:49 by JourneyLucky
[考研] 085600材料与化工 309分请求调剂 +7 dtdxzxx 2026-03-12 8/400 2026-03-13 14:43 by jxchenghu
[考研] 290求调剂 +3 ADT 2026-03-13 3/150 2026-03-13 10:19 by peike
信息提示
请填处理意见