24小时热门版块排行榜    

查看: 3006  |  回复: 8
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

zqt123_1981

木虫 (小有名气)

[求助] 已知全长基因怎样克隆并构建表达载体

目的基因在Genbank有mRNA全长序列,我想把它克隆出来构建表达载体,1 atggctgtag cggaggaact gagaaacgct ccacgtgcaa agggtccggc caccatccta。。。。。。
1141 actgttgtgc tgcatagcat tcctacaatt acaaattaa。请问怎样设计引物克隆全长??pGM-T载体的话还用添加酶切位点与保护碱基吗?有同仁说直接从头尾各选一定长度的碱基就可以吗?怎样验证啊
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

zqt123_1981(金币+1): 2011-07-13 16:38:09
楼主可以多设计几条加上酶切位点的引物!
jiayoubashaonian
6楼2011-07-08 10:05:18
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

yesucao

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

zqt123_1981(金币+1): 2011-07-13 16:38:26
用oligo设计软件,你要想真的扩增它的全长的话确实是取头和尾的一定碱基,酶切位点和保护碱基肯定是要的,你不妨先学学oligo软件,或者是DNAman也是可以的,不过前者更好一些,还有就是学学引物设计原则。
2楼2011-07-07 20:49:10
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yesucao

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

zqt123_1981(金币+1): 2011-07-13 16:38:21
本来还想着给你一篇关于PCR引物设计及软件使用技巧的,怎么没看到上传的字样呢???
3楼2011-07-07 20:51:26
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

【答案】应助回帖

zqt123_1981(金币+1): 2011-07-13 16:38:15
1 引物可以直接取头尾,因为已经是一个完整的CDS了。
2 你先做克隆的话,如果T载上的酶切位点可用,就不需要添加酶切位点和保护碱基了。
Thank-you,so-blue.
4楼2011-07-08 08:43:07
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 2027广东省杰青 +3 奶牛小黑 2026-08-15 5/250 2026-08-16 18:38 by lxmichacl
[基金申请] 快农历七夕节了,轻松一下,男人悄悄话,女施主请不要进来。 +3 Tide man 2026-08-14 3/150 2026-08-16 17:47 by jurkat.1640
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 26/1300 2026-08-16 12:35 by 启萌科技
[基金申请] 我的国基提前知道中了,可是同事的操作让我实在接受不了,怎么会有这样的人 +11 家与远方 2026-08-10 16/800 2026-08-16 10:28 by ray43
[精细化工] 招聘 金属平磨液,抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +6 wangze12014 2026-08-14 7/350 2026-08-15 20:12 by gltch
[基金申请] filecode +8 cratir 2026-08-14 12/600 2026-08-15 18:08 by zyfgau
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +10 majunge000 2026-08-10 13/650 2026-08-15 12:26 by hanpeng972
[基金申请] 各位道友,我要去昆明玩几天,回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果? +4 yuleib84 2026-08-11 4/200 2026-08-14 23:05 by lfy8008
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] 静等基金结果 +8 gjjjzhong 2026-08-10 21/1050 2026-08-13 17:56 by 且听虎啸
[基金申请] Filecode 又变了,巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +4 布布和一二 2026-08-11 5/250 2026-08-13 12:56 by cratir
[基金申请] 结合人工智能,周易传统文化,filecode打分制来了,3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分? +11 yufeiwaner 2026-08-09 13/650 2026-08-12 08:17 by yufeiwaner
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[基金申请] 什么时候出结果,有咨询渠道??? +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 确定了,国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
信息提示
请填处理意见