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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 原核表达SDS-PAGE问题
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qyqy512

铜虫 (初入文坛)

[求助] 原核表达SDS-PAGE问题

最近做原核表达，结果跑出来的PAGE胶样品都是长长的拖带糊带，不像以前跑的那样可以看清条带，做了好几次都是一样，请高手指教，等着做完这部分实验就可以写文章的。。。
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1楼 2011-07-05 14:46:23
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caosaihlwsh

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
西瓜(金币+2): 鼓励应助 2011-07-05 17:24:40
1.更换电泳缓冲液
2.适当降低电压
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2楼2011-07-05 15:37:46
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qyqy512

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by caosaihlwsh at 2011-07-05 15:37:46:
1.更换电泳缓冲液
2.适当降低电压

都试过了，还是一样的拖带
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3楼2011-07-05 15:39:16
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xhjggl

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
dhd997(金币+1): 鼓励交流 2011-07-06 07:40:29
蛋白发生了降解，应该加入蛋白酶抑制试剂混合物（BS380）
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2011-07-05 21:38:31
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zsy1106

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
dhd997(金币+1): 鼓励交流 2011-07-06 07:40:38
是样品中核酸含量太高所致。
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5楼2011-07-05 21:44:19
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qyqy512

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by zsy1106 at 2011-07-05 21:44:19:
是样品中核酸含量太高所致。

那请问应该如何处理
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6楼2011-07-06 08:45:22
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chenlin022

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

qyqy512(金币+5): 2011-07-08 13:45:45
首先确定自己配的胶均匀，一定混匀。
其次要保证自己提取的样品质量一定要好
最后看看自己提取的样品分子量多大，选择适当的胶浓度。电泳电压可以适当降低。有核酸残留可以用DNase和RNase A处理后上样。
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7楼2011-07-06 09:09:47
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gppwfh

金虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
西瓜(金币+4): good 2011-07-19 16:27:19
检查下PAGE BUFFER,我们有次没加SDS，也是带不成型。
另外，就是样品的纯度问题，核酸污染严重。
还可以考虑下做胶的因素
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8楼2011-07-19 14:07:50
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