应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » cDNA做普通PCR扩不出条带来
141/2返回列表12下一页
查看: 4438  |  回复: 13
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

jinglilv

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-07-04 14:50:28
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

wulishu

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
dhd997(金币+5): 热心 2011-07-04 18:01:41
1。检查提取RNA是否有降解，吸光度和电泳图都要看，而且吸光度一定要达到要求，另外你在溶解RNA的时候是否有酒精残留（残留有可能会影响你后续实验）
2。反应体系要按照说明书配制，建议不要自己修改（酶和其他试剂的量），还要注意例如dNTP的浓度与说明书里让加入的是否一致，如果有条件的话建议你用公司事先预混好的酶
3。退火温度过高或过低也有可能得不到目的条带，参照Tm值做一下梯度试试

我遇到过和你差不多的情况，仅供参考
赞一下(4人) 回复此楼
4楼2011-07-04 16:41:26
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

喇叭

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
jinglilv(金币+2): 谢谢 2011-07-04 17:16:12
dhd997(金币+3): good 2011-07-04 18:01:09
应该是反转录的时候就没有cDNA,最大的可能性是提取RNA时RNA被降解了，我以前也出现过这种情况，重新提取RNA再做，每一步都小心一点，一帮都没有问题，还有就是你的cDNA有没有对照试验，例如actin
加油吧，做分子的就是这样
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2011-07-04 15:00:01
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

beautybanana

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): good 2011-07-04 18:01:29
质粒上的基因在肿瘤细胞里表达了没有呢？是否先要检测一下所表达的蛋白啊，如果没有被表达，是不是就得不到相应的cDNA啊？在做PCR就没有产物了呢？我没有做过这，猜测一下的。
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2011-07-04 16:03:19
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

雨城雨

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): good 2011-07-04 18:01:50
1.重新提RNA反转录。
2.以cDNA为模板扩增25-30个循环，以产物为模板二次PCR
赞一下(2人) 回复此楼
5楼2011-07-04 16:56:08
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jinglilv

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
6楼2011-07-04 17:15:54
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jinglilv

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
7楼2011-07-04 17:18:02
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

喇叭

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by jinglilv at 2011-07-04 17:15:54:
当时提出来RNA做了一个电泳，在最下面是有降解条带，但不至于把mRNA给降解完吧。
另外，我没有做过对照实验，麻烦你详细说一下好吗？
非常感谢你的帮助。

对照试验是为了证明自己的cDNA没问题，我做的是丝状真菌的RT-PCR，每种菌都有自己的家族蛋白，如果cDNA好的话，该家族蛋白就会表达，主要是为了验证反转录是否成功
赞一下 回复此楼
8楼2011-07-05 10:20:29
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wulishu

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by jinglilv at 2011-07-04 17:18:02:
提RNA最后一步洗涤的时候我用75%的DEPC水配制的酒精洗了两次。因为洗一次的话会260/230值偏低。是不是和这有关系呢？
非常感谢你的帮助。

没什么关系，无论洗多少次只要最后晾干再加水溶解就可以，但是如果RNA降解的话就不好说了，不一定要都降解完，如果恰好你要PCR的那些降解掉了那么你就P不出来了，所以说一定要保证RNA质量，否则你都不知道问题出在什么地方了
赞一下 回复此楼
9楼2011-07-06 10:12:47
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hijackwu
10楼2012-03-21 16:34:02
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 jinglilv 的主题更新
141/2返回列表12下一页
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0856调剂，是学校就去 +4 sllhht 2026-03-19 5/250 2026-03-19 17:45 by 星空星月
[考研] 0703化学调剂 ，六级已过，有科研经历 +11 曦熙兮 2026-03-15 11/550 2026-03-19 17:13 by yywzz
[考研] 招收调剂硕士 +4 lidianxing 2026-03-19 10/500 2026-03-19 16:05 by 余麟余
[考研] 材料专业求调剂 +5 hanamiko 2026-03-18 5/250 2026-03-18 20:19 by 星空星月
[考研] 26调剂/材料/英一数二/总分289/已过A区线 +7 步川酷紫123 2026-03-13 7/350 2026-03-18 17:12 by 尽舜尧1
[考研] 070300化学319求调剂 +6 锦鲤0909 2026-03-17 6/300 2026-03-18 13:22 by Iveryant
[考研] 材料，纺织，生物（0856、0710），化学招生啦 +3 Eember. 2026-03-17 9/450 2026-03-18 10:28 by Eember.
[考研] 296求调剂 +5 大口吃饭 身体健 2026-03-13 5/250 2026-03-17 21:05 by 不惑可乐
[考研] 11408 一志愿西电，277分求调剂 +3 zhouzhen654 2026-03-16 3/150 2026-03-17 07:03 by laoshidan
[考研] 机械专硕325，寻找调剂院校 +3 y9999 2026-03-15 5/250 2026-03-16 19:58 by y9999
[考研] 0854控制工程 359求调剂 可跨专业 +3 626776879 2026-03-14 9/450 2026-03-16 17:42 by 626776879
[考研] 304求调剂 +4 ahbd 2026-03-14 4/200 2026-03-16 16:48 by 我的船我的海
[考研] 一志愿华中师范071000，325求调剂 +6 RuitingC 2026-03-12 6/300 2026-03-16 14:50 by 可淡不可忘
[考研] 0703 物理化学调剂 +3 我可以上岸的对� 2026-03-13 5/250 2026-03-16 10:50 by 我可以上岸的对�
[考研] 求老师收留调剂 +4 jiang姜66 2026-03-14 5/250 2026-03-15 20:11 by Winj1e
[考研] 22408总分284求调剂 +3 InAspic 2026-03-13 3/150 2026-03-15 11:10 by zhq0425
[考研] 070305求调剂 +3 mlpqaz03 2026-03-14 4/200 2026-03-15 11:04 by peike
[考研] 266求调剂 +4 学员97LZgn 2026-03-13 4/200 2026-03-14 08:37 by zhukairuo
[考研] 304求调剂 +7 7712b 2026-03-13 7/350 2026-03-13 21:42 by peike
[考研] 070303一志愿西北大学学硕310找调剂 +3 d如愿上岸 2026-03-13 3/150 2026-03-13 10:43 by houyaoxu
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭