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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » cDNA做普通PCR扩不出条带来
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jinglilv

禁虫 (小有名气)
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1楼 2011-07-04 14:50:28
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wulishu

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
dhd997(金币+5): 热心 2011-07-04 18:01:41
1。检查提取RNA是否有降解，吸光度和电泳图都要看，而且吸光度一定要达到要求，另外你在溶解RNA的时候是否有酒精残留（残留有可能会影响你后续实验）
2。反应体系要按照说明书配制，建议不要自己修改（酶和其他试剂的量），还要注意例如dNTP的浓度与说明书里让加入的是否一致，如果有条件的话建议你用公司事先预混好的酶
3。退火温度过高或过低也有可能得不到目的条带，参照Tm值做一下梯度试试

我遇到过和你差不多的情况，仅供参考
赞一下(4人) 回复此楼
4楼2011-07-04 16:41:26
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喇叭

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
jinglilv(金币+2): 谢谢 2011-07-04 17:16:12
dhd997(金币+3): good 2011-07-04 18:01:09
应该是反转录的时候就没有cDNA,最大的可能性是提取RNA时RNA被降解了，我以前也出现过这种情况，重新提取RNA再做，每一步都小心一点，一帮都没有问题，还有就是你的cDNA有没有对照试验，例如actin
加油吧，做分子的就是这样
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2楼2011-07-04 15:00:01
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beautybanana

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): good 2011-07-04 18:01:29
质粒上的基因在肿瘤细胞里表达了没有呢？是否先要检测一下所表达的蛋白啊，如果没有被表达，是不是就得不到相应的cDNA啊？在做PCR就没有产物了呢？我没有做过这，猜测一下的。
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3楼2011-07-04 16:03:19
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雨城雨

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): good 2011-07-04 18:01:50
1.重新提RNA反转录。
2.以cDNA为模板扩增25-30个循环，以产物为模板二次PCR
赞一下(2人) 回复此楼
5楼2011-07-04 16:56:08
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