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jinglilv

禁虫 (小有名气)

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雨城雨

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): good 2011-07-04 18:01:50
1.重新提RNA反转录。
2.以cDNA为模板扩增25-30个循环,以产物为模板二次PCR
5楼2011-07-04 16:56:08
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喇叭

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
jinglilv(金币+2): 谢谢 2011-07-04 17:16:12
dhd997(金币+3): good 2011-07-04 18:01:09
应该是反转录的时候就没有cDNA,最大的可能性是提取RNA时RNA被降解了,我以前也出现过这种情况,重新提取RNA再做,每一步都小心一点,一帮都没有问题,还有就是你的cDNA有没有对照试验,例如actin
加油吧,做分子的就是这样
2楼2011-07-04 15:00:01
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beautybanana

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): good 2011-07-04 18:01:29
质粒上的基因在肿瘤细胞里表达了没有呢?是否先要检测一下所表达的蛋白啊,如果没有被表达,是不是就得不到相应的cDNA啊?在做PCR就没有产物了呢?我没有做过这,猜测一下的。
3楼2011-07-04 16:03:19
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wulishu

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
dhd997(金币+5): 热心 2011-07-04 18:01:41
1。检查提取RNA是否有降解,吸光度和电泳图都要看,而且吸光度一定要达到要求,另外你在溶解RNA的时候是否有酒精残留(残留有可能会影响你后续实验)
2。反应体系要按照说明书配制,建议不要自己修改(酶和其他试剂的量),还要注意例如dNTP的浓度与说明书里让加入的是否一致,如果有条件的话建议你用公司事先预混好的酶
3。退火温度过高或过低也有可能得不到目的条带,参照Tm值做一下梯度试试

我遇到过和你差不多的情况,仅供参考
4楼2011-07-04 16:41:26
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