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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » puf酶与普通Taq酶混用PCR问题
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mahoumeimei

金虫 (小有名气)

[求助] puf酶与普通Taq酶混用PCR问题

之前用普通Taq酶做的PCR，目的条带比较单一而且很亮，因为要做A/T克隆测序，担心普通Taq酶会导致突变，所以将puf与Taq按1:2混合使用，结果P不出来。请问各位高手，我该作何调整？
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1楼 2011-06-29 10:40:53
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aofeng860308

木虫 (正式写手)
引用回帖:
1735308楼: Originally posted by 西瓜 at 2011-06-29 10:52:29
P不出来不好说，但是如果做T/A克隆到话，加Pfu酶不行啊。Pfu酶有3'至5'的外切酶活性（校正功能的来源），会把产物末端的A切掉的，做不了T/A克隆。
T/A克隆接触不多，等高人解答吧

这个情况应该是和比例有关吧，生工的Taq plus 就是Taq里加了pfu的，同时具有高保真和末端加A的功能。
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21楼2012-08-04 15:57:22
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aofeng860308

木虫 (正式写手)
引用回帖:
1735308楼: Originally posted by 西瓜 at 2011-06-29 10:52:29
P不出来不好说，但是如果做T/A克隆到话，加Pfu酶不行啊。Pfu酶有3'至5'的外切酶活性（校正功能的来源），会把产物末端的A切掉的，做不了T/A克隆。
T/A克隆接触不多，等高人解答吧

这个情况应该是和比例有关吧，生工的Taq plus 就是Taq里加了pfu的，同时具有高保真和末端加A的功能。
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22楼2012-08-04 15:57:30
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