| 查看: 2177 | 回复: 9 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
2008116068木虫 (著名写手)
|
[求助]
PCR扩增出现的问题
|
||
|
我从一个8K质粒上扩增一段2.8K的目的片段，无论自己设计引物（16到22个碱基）还是按文献提供的引物（35和38个碱基），均扩增不出来。已经花了一个月的时间了，如果再扩增不出来，下个月就要换课题了。 目的片度的特点是GC含量约30%。 各位虫友，有什么好的建议吗？对我来说很重要，就麻烦大家了。 谢谢  |
回复此楼» 猜你喜欢
售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急
已经有8人回复
-
体制内长辈说体制内绝大部分一辈子在底层，如同你们一样大部分普通教师忙且收入低
已经有13人回复
-
售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急
已经有8人回复
-
售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急
已经有8人回复
-
售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急
已经有11人回复
-
为什么中国大学工科教授们水了那么多所谓的顶会顶刊，但还是做不出宇树机器人？
已经有8人回复
-
售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急
已经有5人回复
-
售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急
已经有6人回复
-
售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急
已经有9人回复
-
售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急
已经有4人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- PCR扩增问题
已经有21人回复
- 求助 土壤基因组 PCR 扩增问题
已经有30人回复
- PCR扩增问题
已经有5人回复
- 16S PCR扩增的问题
已经有11人回复
- 定量pcr的污染问题
已经有6人回复
- 【求助/交流】荧光PCR扩增曲线问题
已经有18人回复
- 【求助/交流】关于PCR的问题
已经有18人回复
|
好吧，这么说吧： 1。确保你的模板没有任何问题，质粒用试剂盒重新抽提。 2.你要扩增的片段是从640-3490，AT含量较高，引物不好设计，你应该考试试专门针对AT-rich的扩增方法。 3.如果还是不行的话，建议你不要再纠结于引物扩增，而改用酶切回收，看了一下酶切位点还是有很多可以选择的，提供两个和你两端比较接近的 5‘端： BamHI 2 G/GATCC 635 5578 3'端：SwaI 2 ATTT/AAAT 3470 6123 直接回收635-3470片段大小的， 后面看你想干嘛了，用Taq酶补平加A尾进行TA克隆；或者再用你的引物PCR试试，应该没有什么太麻烦的二级结构了 都试试吧 |
9楼2011-06-18 16:08:37
天使托
专家顾问 (职业作家)
T.Shen
-
专家经验: +57 - MicEPI: 13
- 应助: 95 (初中生)
- 贵宾: 0.263
- 金币: 16351.8
- 散金: 593
- 红花: 74
- 沙发: 9
- 帖子: 3650
- 在线: 288.3小时
- 虫号: 441757
- 注册: 2007-10-27
- 专业: 微生物生理与生物化学
- 管辖: 微生物
2楼2011-06-14 17:48:11
3楼2011-06-14 18:41:43
2008116068
木虫 (著名写手)
- 应助: 3 (幼儿园)
- 金币: 4612.6
- 散金: 294
- 红花: 3
- 帖子: 1115
- 在线: 364.5小时
- 虫号: 701164
- 注册: 2009-02-14
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
|
目标序列为 CTAACTTATAGGGGTAACACTTAAAAAAGAATCAATAACGATAGAAACCGCTCCTAAAGCAGGTGCATTTTTTCCTAACGAAGAAGGCAATAGTTCACATTTATTGTCTAAATGAGAATGGACTCTAGAAGAAACTTCGTTTTTAATCGTATTTAAAACAATGGGATGAGATTCAATTATATGATTTCTCAAGATAACAGCTTCTATATCAAATGTATTAAGGATATTGGTTAATCCAATTCCGATATAAAAGCCAAAGTTTTGAAGTGCATTTAACATTTCTACATCATTTTTATTTGCGCGTTCCACAATCTCTTTTCGAGAAATATTCTTTTCTTCTTTAGAGAGCGAAGCCAGTAACGCTTTTTCAGAAGCATATAATTCCCAACAGCCTCGATTTCCACAGCTGCATTTGGGTCCATTAAAATCTATCGTCATATGACCCATTTCCCCAGAAAAACCCTGAACACCTTTATACAATTCGTTGTTAATAACAAGTCCAGTTCCAATTCCGATATTAATACTGATGTAAACGATGTTTTCATAGTTTTTTGTCATACCAAATACTTTTTCACCGTATGCTCCTGCATTAGCTTCATTTTCAACAAAAACCGGAACATTAAACTCACTCTCAATTAAAAACTGCAAATCTTTGATATTCCAATTTAAGTTAGGCATGAAAATAATTTGCTGATGACGATCTACAAGGCCTGGAACACAAATTCCTATTCCGACTAGACCATAAGGGGACTCAGGCATATGGGTTACAAAACCATGAATAAGTGCAAATAAAATCTCTTTTACTTCACTAGCGGAAGAACTAGACAAGTCAGAAGTCTTCTCGAGAATAATATTTCCTTCTAAGTCGGTTAGAATTCCGTTAAGATAGTCGACTCCTATATCAATACCAATCGAGTAGCCTGCATTCTTATTAAAAACAAGCATTACAGGTCTTCTGCCGCCTCTAGATTGCCCTGCCCCAATTTCAAAAATAAAATCTTTTTCAAGCAGTGTATTTACTTGAGAGGAGACAGTAGACTTGTTTAATCCTGTAATCTCAGAGAGAGTTGCCCTGGAGACAGGGGAGTTCTTCAAAATTTCATCTAATATTAATTTTTGATTCATTTTTTTTACTAAAGCTTGATCTGCAATTTGAATAATAACCACTCCTTTGTTTATCCACCGAACTAAGTTGGTGTTTTTTGAAGCTTGAATTAGATATTTAAAAGTATCATATCTAATATTATAACTAAATTTTCTAAAAAAAACATTGAAATAAACATTTATTTTGTATATGATGAGATAAAGTTAGTTTATTGGATAAACAAACTAACTCAATTAAGATAGTTGATGGATAAACTTGTTCACTTAAATCAAAGGGGGAAATGACAAATGGTCCAAACTAGTGATATCTAAAAATCAAAGGGGGAAATGAGATCTATGGTAAGCCGATACGTACCCGATATGGGCGATCTGATTTGGGTTGATTTTGACCCGACAAAAGGTAGCGAGCAAGCTGGACATCGTCCAGCTGTTGTCCTGAGTCCTTTCATGTACAACAACAAAACAGGTATGTGTCTGTGTGTTCCTTGTACAACGCAATCAAAAGGATATCCGTTCGAAGTTGTTTTATCCGGTCAGGAACGTGATGGCGTAGCGTTAGCTGATCAGGTAAAAAGTATCGCCTGGCGGGCAAGAGGAGCAACGAAGAAAGGAACAGTTGCCCCAGAGGAATTACAACTCATTAAAGCCAAAATTAACGTACTGATTGGGTAGGCATGCTAATGCGGCCGCGAATTCCTGCAGCCCTGGCGAATGGCGATTTTCGTTCGTGAATACATGTTATAATAACTATAACTAATAACGTAACGTGACTGGCAAGAGATATTTTTAAAACAATGAATAGGTTTACACTTACTTTAGTTTTATGGAAATGAAAGATCATATCATATATAATCTAGAATAAAATTAACTAAAATAATTATTATCTAGATAAAAAATTTAGAAGCCAATGAAATCTATAAATAAACTAAATTAAGTTTATTTAATTAACAACTATGGATATAAAATAGGTACTAATCAAAATAGTGAGGAGGATATATTTGAATACATACGAACAAATTAATAAAGTGAAAAAAATACTTCGGAAACATTTAAAAAATAACCTTATTGGTACTTACATGTTTGGATCAGGAGTTGAGAGTGGACTAAAACCAAATAGTGATCTTGACTTTTTAGTCGTCGTATCTGAACCATTGACAGATCAAAGTAAAGAAATACTTATACAAAAAATTAGACCTATTTCAAAAAAAATAGGAGATAAAAGCAACTTACGATATATTGAATTAACAATTATTATTCAGCAAGAAATGGTACCGTGGAATCATCCTCCCAAACAAGAATTTATTTATGGAGAATGGTTACAAGAGCTTTATGAACAAGGATACATTCCTCAGAAGGAATTAAATTCAGATTTAACCATAATGCTTTACCAAGCAAAACGAAAAAATAAAAGAATATACGGAAATTATGACTTAGAGGAATTACTACCTGATATTCCATTTTCTGATGTGAGAAGAGCCATTATGGATTCGTCAGAGGAATTAATAGATAATTATCAGGATGATGAAACCAACTCTATATTAACTTTATGCCGTATGATTTTAACTATGGACACGGGTAAAATCATACCAAAAGATATTGCGGGAAATGCAGTGGCTGAATCTTCTCCATTAGAACATAGGGAGAGAATTTTGTTAGCAGTTCGTAGTTATCTTGGAGAGAATATTGAATGGACTAATGAAAATGTAAATTTAACTATAAACTATTTAAATAACAGATTAAAAAAATTATAAAAAAATTGAAAAAATGGTGGAAACACTTTTTTCAATTTTTTTGTTTTATTATTTAATATTTGGGAAATATTCATTCTAATTGGTAATCAGATTTTAGAAAACAATAAACCCTTGCATAGGGGGATCTCG |
4楼2011-06-14 22:44:11
