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两个基因融合不起来
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现在在做基因的融合表达，把A和B两个基因用overlapPCR的方法融合起来。A B两个基因都用PCR的方法扩出来了，大小与预期的大小一致，并且都是用的保真酶。但overlapPCR就是做不好，两个基因怎么也融合不到一起，都做了好几遍了，我用的是PFU酶，2kb/min,融合基因大概2500bp,是不是酶的问题啊，扩增速度太慢了？ 还有就是我的A基因是直接从基因组中扩增的，B基因是从构建好的PQE载体中扩增的。是不是必须要从构建好的载体中扩增啊？哪位高手指点下啊 |
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空谷幽风
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7楼2011-06-13 15:28:11
西瓜
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【答案】应助回帖
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da_da(金币+2): 2011-06-13 18:35:28
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dhd997(金币+5): good 2011-07-04 18:04:43
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基因从哪里扩增出来的没关系的。 Overlaping PCR的产物一般很少的，条带很淡，你的图最好上来看看。我做的一般上10ul的样，能看到淡淡的条带就ok，有杂带也ok，因为我们还会再拿这个产物作为模板再进行一次扩增。 我印象中Pfu酶的扩增速度比Taq会慢很多，Taq一般是1kb/min，Pfu是600bp/min左右，楼主用的哪家的Pfu酶？2kb/min很快啊。 |
2楼2011-06-12 17:45:06
lxj341401
至尊木虫 (著名写手)
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