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银虫 (正式写手)

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
silicare(金币+6, EPI+1): 2011-06-10 12:22:39

我也深受这个问题困扰。后来我做了一系列降解实验（故意在一些环节出问题，看RNA提取情况）。
相信我，过程都是平行重复3次。有空我会把整个实验发出来。
这里直接说结果吧：
1.RNA几乎不会在电泳过程中降解，无论是放了很久的胶，还是很久没换水的电泳液。
2.OD比值只能大概参考。因为，260和280不知有RNA会吸收，还有很多其他物质。最后这个比值可能是许多原因综合的结果。
3.就是RNA部分降解也能反转，PCR验证基本也没问题。

另外，你的图没发上。具体情况没发分析。
总之我的建议：
1.RNA提取的要点是选对方法，什么组织用什么方法（网上一堆方法，也有很多kit卖）。方法对了肯定能提出来，最多操作不好有部分降解。
2.操作嘛尽量快。
3.反转录的管子干净，很多降解发生在反转录过程。但我的实验从没出现过。
4.所有实验重复3次。是否3次都提不出来？3次都反转没结果？有重复性的失败才有讨论价值。
5.最后，RNA提取真的只是个非常小而简单的实验，试剂是最重要的，不是怕污染而是怕过期！我用自来水溶RNA一样条带完整

（我当时也被雷到）。