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银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
silicare(金币+6, EPI+1): 2011-06-10 12:22:39
我也深受这个问题困扰。后来我做了一系列降解实验(故意在一些环节出问题,看RNA提取情况)。
相信我,过程都是平行重复3次。有空我会把整个实验发出来。
这里直接说结果吧:
1.RNA几乎不会在电泳过程中降解,无论是放了很久的胶,还是很久没换水的电泳液。
2.OD比值只能大概参考。因为,260和280不知有RNA会吸收,还有很多其他物质。最后这个比值可能是许多原因综合的结果。
3.就是RNA部分降解也能反转,PCR验证基本也没问题。

另外,你的图没发上。具体情况没发分析。
总之我的建议:
1.RNA提取的要点是选对方法,什么组织用什么方法(网上一堆方法,也有很多kit卖)。方法对了肯定能提出来,最多操作不好有部分降解。
2.操作嘛尽量快。
3.反转录的管子干净,很多降解发生在反转录过程。但我的实验从没出现过。
4.所有实验重复3次。是否3次都提不出来?3次都反转没结果? 有重复性的失败才有讨论价值。
5.最后,RNA提取真的只是个非常小而简单的实验,试剂是最重要的,不是怕污染而是怕过期!我用自来水溶RNA一样条带完整(我当时也被雷到)。
3楼2011-06-09 22:44:21
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