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求助PCR老是跑不出条带
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我跑PCR跑了好几次，只有一次出过条带。试剂都是新买的，加样也没有错。不知哪里出了问题。引物用的16s RDNA通用引物5’-TACCTTGTTACGACTT- 3’ 和5’-AGAGTTTGATCATGGC-3，复性温度用的40度。（曾做过42,44,46,48,50的温度梯度也没有条带）我把那个唯一出条带的电泳图和总DNA也发上来了。求高手指点！必谢！还有几天就毕业了，还没有做完实验，很着急，求大师指点！ 是不是复性温度不够好？文献上用的比较长的F27和R1492引物是57度，我那两条引物的Tm分别是48和44，因为做梯度也没出结果，就自己设了个40度。 不知表述清楚没有，谢谢了。   [ Last edited by 1949stone on 2011-6-2 at 15:56 ] |
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 【分子生物】EPI帖 |
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1949stone(金币+1): 的确有很多疑问啊 2011-06-02 14:55:51
1949stone(金币+1): 的确有很多疑问啊 2011-06-02 14:55:51
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3楼2011-06-02 14:11:19
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dhd997(金币+2): good 2011-06-04 19:05:01
dhd997(金币+2): good 2011-06-04 19:05:01
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6楼2011-06-02 15:25:19