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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 有人知道毕赤酵母 氯化锂转化里面鲑鱼精 怎么配制的不？
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hubayi

新虫 (初入文坛)

[求助] 有人知道毕赤酵母 氯化锂转化里面鲑鱼精 怎么配制的不？

如题，希望各位大哥大姐帮帮小弟，知道的留个言。
具体的配制方法  溶液 浓度都给小弟介绍下
谢谢哈
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1楼 2011-06-01 21:40:25
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diduqiong

木虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
dhd997(金币+6, EPI+1): 一并奖励 2011-06-02 18:49:57
很麻烦很麻烦，当时配了两天
取50mg鲑鱼精，加4mlTE,用Tip上下抽吸使其溶解，打碎至分子量在2Kb-20Kb之间（跑电泳验证，跑一微升即可），然后苯酚氯仿抽提，然后加NaAc，然后用异丙醇沉淀，70%的乙醇洗涤，加TE至终浓度为2mg∕ml，沸水煮20分钟变性，分装后负20度保存。
注意在沸水煮后测一下染色体浓度，然后算一下加多少TE,毕赤酵母醋酸锂转化里有用到10×TE，这里溶鲑鱼精的是1×TE，可以用那个稀释一下，稀释前灭下菌
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狗屎养鲜花
2楼2011-06-02 14:43:32
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hubayi

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by diduqiong at 2011-06-02 14:43:32:
很麻烦很麻烦，当时配了两天
取50mg鲑鱼精，加4mlTE,用Tip上下抽吸使其溶解，打碎至分子量在2Kb-20Kb之间（跑电泳验证，跑一微升即可），然后苯酚氯仿抽提，然后加NaAc，然后用异丙醇沉淀，70%的乙醇洗涤，加TE至 ...

请问，各种试剂的浓度，比例，还有用量各是多少呢？
希望您能帮帮我，谢谢
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3楼2011-06-02 15:45:57
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diduqiong

木虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

hubayi(金币+1): 好的，谢谢你 2011-06-02 23:20:34
引用回帖:
Originally posted by hubayi at 2011-06-01 19:45:57:
请问，各种试剂的浓度，比例，还有用量各是多少呢？
希望您能帮帮我，谢谢

TE (Tris EDTA)   10mmol∕L Tris 1mmol∕LEDTA
NaAc也可以用KAc代替   5mol∕L
苯酚氯仿抽提的比例跟提质粒时是一样的 样品：苯酚：氯仿=2:1:1
异丙醇加等体积
还有什么不明白的，希望可以帮到你
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狗屎养鲜花
4楼2011-06-02 15:53:49
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