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双元表达载体 农杆菌EHA105
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新虫
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[交流]
双元表达载体 农杆菌EHA105
我想用农杆菌EHA105构建双元表达载体,我手上现在有pcambia1301,和空的农杆菌EHA105,是不是还需要一个带有Vir基因的辅助质粒。将1301和辅助质粒一起转到农杆菌里?
多谢大家!
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2011-05-25 20:27:08
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海尤希
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2484940楼
:
Originally posted by
XOooZzz
at 2013-03-14 17:13:53
朋友挖得一手好坟...
你的基因是要做什么用的呢?超表达?在特定组织表达?你的目标植物是什么?
最普通的情况是,让一个基因在拟南芥里面超表达。这样直接改造常用的pCAMBIA1301就可以了,通过酶切连接的方法用 ...
我的目标植物是水稻,就是要将GFP整合上去,可以直接替换GUS,借用它的启动子吗?还是说要自己重新连接启动子然后连接到MCS??
我被启动子搞晕了。。
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8楼
2013-03-24 11:41:18
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咸鱼
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116093626(金币
+1
):谢谢参与
jhu132llh(金币+5, EPI+1): 是滴,鼓励积极帮助新虫 2011-05-26 09:27:05
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Originally posted by
116093626
at 2011-05-25 20:27:08:
我想用农杆菌EHA105构建双元表达载体,我手上现在有pcambia1301,和空的农杆菌EHA105,是不是还需要一个带有Vir基因的辅助质粒。将1301和辅助质粒一起转到农杆菌里?
多谢大家!
不需要,你需要将你的基因先克隆到一个有启动子的载体上,然后将启动子一起切下来连接到pCambia1301上,然后转化EHA105即可。因为1301在多克隆位点前无启动子。
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Bella0224
2楼
2011-05-25 21:01:14
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jhu132llh(金币+3): 积极提问交流奖 2011-05-26 09:27:35
引用回帖:
Originally posted by
咸鱼
at 2011-05-25 21:01:14:
不需要,你需要将你的基因先克隆到一个有启动子的载体上,然后将启动子一起切下来连接到pCambia1301上,然后转化EHA105即可。因为1301在多克隆位点前无启动子。
双元表达载体不是一个质粒带有t-dna 一个质粒带Vir基因么?1301上也没有Vir基因呀
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3楼
2011-05-25 21:27:45
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jinyuw
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jhu132llh(金币+2): 鼓励积极交流 2011-05-30 09:27:59
敢问二楼的,农杆菌EHA104和EHA105有和区别呀,我正在做EHA104的转化。
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4楼
2011-05-29 21:18:09
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