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wangchunling金虫 (小有名气)
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pmd18-t连不上
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| 最近在做一个基因的克隆，载体是pmd18t，菌液pcr之后电泳，总是连不上，怎么回事儿呢？按照说明书做的…… |
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 【分子生物】EPI帖 |
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beautybanana
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【答案】应助回帖
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dhd997(金币+6, EPI+1): good 2011-05-19 12:47:32
wangchunling(金币+3): 2011-05-20 09:52:27
wangchunling(金币+2): 2011-05-21 08:31:48
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pMD18-T vector ligation system pMD18-T 1uL DNA template 4uL Solution I 5uL Total 10uL 将纯化的PCR产物与T载体连接重组，16℃保温3～4h后，全量（10uL）转化至150uL的E.coli DH5α的感受态细胞。 (1) 将10μL连接液移入含200μL感受态细胞的1.5mL dorf管中，冰浴30-60min。 (2) 42℃水浴热激90sec后，立即再冰浴5min。 (3) 加入300μL LB液体培养基，37℃ 220 rpm培养1-2h。 (4) 吸100μL菌液涂布含Amp/ X-Gal/ IPTG平板培养基的LB固体培养基平板， 37℃ 培养16－24h。 供参考，我以前做的，木问题的。保证PCR产物或感受态细胞的质量即可。 附上连接后的图片供参考~  |
2楼2011-05-19 10:38:24
wangchunling
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3楼2011-05-19 13:30:40
jyfxmc
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