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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » DNA测序求助
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lihongyeer

金虫 (正式写手)

[求助] DNA测序求助

想通过16s rDNA来对微生物进行鉴定，但测序公司回复说：“您的样品（10株）的1492R向    的测序结果出现了重叠峰，测序失败，这有可能是您的模板存在污染，或是由于引物与模板的结合性不单一，导致扩增过程中有大小相近的非特异性条带杂片段产生，而琼脂糖回收无法分离这样的片段所致，建议您改进实验条件重新提供样品”
菌株我是通过四轮分离纯化的，应该不会全部污染，引物我用的是通用引物1492r和27f，DNA提取使用的天根生化的细菌基因组DNA提取试剂盒，请问各位有经验的虫友，现在该怎么做？
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Strivetomakeeverydayjoyfulandmeaningful！
1楼 2011-05-18 15:16:13
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wolfebst

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

lihongyeer(金币+2): 2011-05-18 15:47:38
进行克隆测序，呵呵，或者把菌株邮到测序公司，他们就能直接做，费用稍微高点
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2楼2011-05-18 15:37:22
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lihongyeer

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by wolfebst at 2011-05-18 15:37:22:
进行克隆测序，呵呵，或者把菌株邮到测序公司，他们就能直接做，费用稍微高点

实验室一点分子的基础都没有，克隆测序对菜鸟级的我有难度；测序公司问过了，一株要500，抗不住哇
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Strivetomakeeverydayjoyfulandmeaningful！
3楼2011-05-18 15:49:11
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wolfebst

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
amisking(金币+3): 鼓励应助 2011-05-18 19:32:06
你这个情况必须克隆测
即使自己在实验室做，最后价钱也差不多，还容易做不出来
我们实验室两个都能做，但是最后算下来成本基本持平
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4楼2011-05-18 15:51:11
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lihongyeer

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by wolfebst at 2011-05-18 15:51:11:
你这个情况必须克隆测
即使自己在实验室做，最后价钱也差不多，还容易做不出来
我们实验室两个都能做，但是最后算下来成本基本持平

谢谢你的建议，你有没有做克隆的方法，能分享一下吗，多谢啦
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Strivetomakeeverydayjoyfulandmeaningful！
5楼2011-05-18 15:53:52
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wolfebst

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

lihongyeer(金币+10): 2011-05-18 15:59:25
分子克隆实验手册上有
你可以去看看
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6楼2011-05-18 15:58:22
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lihongyeer

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by wolfebst at 2011-05-18 15:58:22:
分子克隆实验手册上有
你可以去看看

好的，谢谢，你送样做的话是哪个公司做的，价格怎么样？
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Strivetomakeeverydayjoyfulandmeaningful！
7楼2011-05-18 16:00:18
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wolfebst

至尊木虫 (职业作家)
引用回帖:
Originally posted by lihongyeer at 2011-05-18 16:00:18:
好的，谢谢，你送样做的话是哪个公司做的，价格怎么样？

宝生物比较好，500-600一个菌
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8楼2011-05-18 16:03:09
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lihongyeer

金虫 (正式写手)
好的，谢谢
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Strivetomakeeverydayjoyfulandmeaningful！
9楼2011-05-18 16:04:51
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lihongyeer

金虫 (正式写手)
10楼2011-05-18 21:17:04
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