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lihongyeer

金虫 (正式写手)

[求助] DNA测序求助

想通过16s rDNA来对微生物进行鉴定,但测序公司回复说:“您的样品(10株)的1492R向    的测序结果出现了重叠峰,测序失败,这有可能是您的模板存在污染,或是由于引物与模板的结合性不单一,导致扩增过程中有大小相近的非特异性条带杂片段产生,而琼脂糖回收无法分离这样的片段所致,建议您改进实验条件重新提供样品”
菌株我是通过四轮分离纯化的,应该不会全部污染,引物我用的是通用引物1492r和27f,DNA提取使用的天根生化的细菌基因组DNA提取试剂盒,请问各位有经验的虫友,现在该怎么做?
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Strivetomakeeverydayjoyfulandmeaningful!
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wolfebst

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

lihongyeer(金币+2): 2011-05-18 15:47:38
进行克隆测序,呵呵,或者把菌株邮到测序公司,他们就能直接做,费用稍微高点
2楼2011-05-18 15:37:22
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lihongyeer

金虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by wolfebst at 2011-05-18 15:37:22:
进行克隆测序,呵呵,或者把菌株邮到测序公司,他们就能直接做,费用稍微高点

实验室一点分子的基础都没有,克隆测序对菜鸟级的我有难度;测序公司问过了,一株要500,抗不住哇
Strivetomakeeverydayjoyfulandmeaningful!
3楼2011-05-18 15:49:11
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wolfebst

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
amisking(金币+3): 鼓励应助 2011-05-18 19:32:06
你这个情况必须克隆测
即使自己在实验室做,最后价钱也差不多,还容易做不出来
我们实验室两个都能做,但是最后算下来成本基本持平
4楼2011-05-18 15:51:11
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lihongyeer

金虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by wolfebst at 2011-05-18 15:51:11:
你这个情况必须克隆测
即使自己在实验室做,最后价钱也差不多,还容易做不出来
我们实验室两个都能做,但是最后算下来成本基本持平

谢谢你的建议,你有没有做克隆的方法,能分享一下吗,多谢啦
Strivetomakeeverydayjoyfulandmeaningful!
5楼2011-05-18 15:53:52
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wolfebst

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

lihongyeer(金币+10): 2011-05-18 15:59:25
分子克隆实验手册上有
你可以去看看
6楼2011-05-18 15:58:22
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lihongyeer

金虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by wolfebst at 2011-05-18 15:58:22:
分子克隆实验手册上有
你可以去看看

好的,谢谢,你送样做的话是哪个公司做的,价格怎么样?
Strivetomakeeverydayjoyfulandmeaningful!
7楼2011-05-18 16:00:18
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wolfebst

至尊木虫 (职业作家)

引用回帖:
Originally posted by lihongyeer at 2011-05-18 16:00:18:
好的,谢谢,你送样做的话是哪个公司做的,价格怎么样?

宝生物比较好,500-600一个菌
8楼2011-05-18 16:03:09
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lihongyeer

金虫 (正式写手)

好的,谢谢
Strivetomakeeverydayjoyfulandmeaningful!
9楼2011-05-18 16:04:51
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lihongyeer

金虫 (正式写手)

10楼2011-05-18 21:17:04
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