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lct515

新虫 (著名写手)

[求助] pnpp法测定脂肪酶问题

我用的p-NPP(对硝基苯棕榈酸酯)法测脂肪酶活性,1mmol/L p-NPP的配置方法是:先0.0378g p-NPP再加入1mL曲拉通-100与5mL异丙醇再用Tris-HCl(pH8.0)定容至100mL。

    测定酶的活性时:取1.5mL 1mmol/L的p-NPP与1.5mLTris-HCl(pH8.0)再加入0.5mL粗酶液10min后再加入8.2mL蒸馏水,对照以0.5mL 90度酶活的粗酶液其他条件相同。紫外410nm处测吸光度。

    但我现在出现问题是:1 灭活的酶液的吸光度比没有灭活的要高 2 配置p-NPP溶液时p-Npp并不完全溶解 3 即使待测酶是标准的脂肪酶10min后也不会发现明显的颜色变化。

    请问是什么原因,谢谢!!!
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xym2007

银虫 (小有名气)

人工底物本身在碱性条件下就会有自发水解
6楼2011-07-21 16:45:34
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10809036

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

lct515(金币+5): 2011-05-18 11:39:05
你好  ,你把p-npp配好后  。乳化一下,就溶解了  我们都是这样。
想要走得快,就单独上路;想要走得远,就结伴同行!!
3楼2011-05-18 11:19:05
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lct515

新虫 (著名写手)

引用回帖:
Originally posted by 10809036 at 2011-05-18 11:19:05:
你好  ,你把p-npp配好后  。乳化一下,就溶解了  我们都是这样。

其他的问题你知道是什么原因吗?
4楼2011-05-18 11:38:54
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10809036

铜虫 (小有名气)

空白对照你设成是不加酶液的 反应底物,用酶标仪测以后我们的都是正值,因为底物空白为零。你的其他两种情况可能是   酶活太低,造成颜色不是很明显
想要走得快,就单独上路;想要走得远,就结伴同行!!
5楼2011-05-18 14:38:37
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