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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » pnpp法测定脂肪酶问题
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lct515

新虫 (著名写手)

[求助] pnpp法测定脂肪酶问题

我用的p-NPP（对硝基苯棕榈酸酯）法测脂肪酶活性，1mmol/L p-NPP的配置方法是：先0.0378g p-NPP再加入1mL曲拉通-100与5mL异丙醇再用Tris-HCl（pH8.0）定容至100mL。

    测定酶的活性时：取1.5mL 1mmol/L的p-NPP与1.5mLTris-HCl（pH8.0)再加入0.5mL粗酶液10min后再加入8.2mL蒸馏水，对照以0.5mL 90度酶活的粗酶液其他条件相同。紫外410nm处测吸光度。

    但我现在出现问题是：1 灭活的酶液的吸光度比没有灭活的要高 2 配置p-NPP溶液时p-Npp并不完全溶解 3 即使待测酶是标准的脂肪酶10min后也不会发现明显的颜色变化。

    请问是什么原因，谢谢！！！
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1楼 2011-05-16 20:30:37
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wenze2019

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 10809036 at 2011-05-18 11:19:05
你好  ，你把p-npp配好后  。乳化一下，就溶解了  我们都是这样。

你好 我们课题组是将p-npp溶解在乙醇里 但是溶解度一直不好 请问你说的乳化一下是什么意思啊 是用乳化仪吗?
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10楼2013-10-16 19:38:20
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10809036

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

lct515(金币+5): 2011-05-18 11:39:05
你好  ，你把p-npp配好后  。乳化一下，就溶解了  我们都是这样。
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想要走得快，就单独上路；想要走得远，就结伴同行！！
3楼2011-05-18 11:19:05
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lct515

新虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by 10809036 at 2011-05-18 11:19:05:
你好  ，你把p-npp配好后  。乳化一下，就溶解了  我们都是这样。

其他的问题你知道是什么原因吗？
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4楼2011-05-18 11:38:54
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10809036

铜虫 (小有名气)
空白对照你设成是不加酶液的 反应底物，用酶标仪测以后我们的都是正值，因为底物空白为零。你的其他两种情况可能是   酶活太低，造成颜色不是很明显
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想要走得快，就单独上路；想要走得远，就结伴同行！！
5楼2011-05-18 14:38:37
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