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guangxidaxue金虫 (小有名气)
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求助毕赤酵母电转化问题
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酵母是GS115，载体pPIC9K，构建成功后有11KB。SacI线性化。 电转化步骤：调但菌落培养过夜，然后转接100ML YPD培养基中，OD600约1.1~1.5时收集细胞，4度离心，冰水洗二次，1M山梨醇洗一次，最后用1ML山梨醇溶，取80UL与5-10ugDNA混溶，转入0.2cm预冷电转杯中，冰浴5min！1.5kv，25μF，200Ω条件下进行电转，立即加1ML 1M山梨醇，然后涂MD板！ 在以上的条件下做了好几次了都没有长，求各位高手大侠帮帮忙！指点下。。。万分感谢！ |
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