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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 土壤总DNA提取步骤中，加入异丙醇后，静置，出现分层，求助高手
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jipojiong

木虫 (小有名气)

[交流] 土壤总DNA提取步骤中，加入异丙醇后，静置，出现分层，求助高手

采用直接提取法提取土壤基因组，具体操作方法可参照http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=3024619
中的步骤

问题是这样，加入0.6倍的异丙醇后，出现明显的分层现象，上层无色，下层淡黄色，请问为什么分层，接下来该如何提取？

个人感觉下层应该是氯仿，但前面的步骤中离心后吸取上清并没有把下层的氯仿吸到呀。求助高手
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1楼 2011-05-10 15:09:27
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jiajunhui

至尊木虫 (著名写手)
★
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jipojiong(金币+2): 沙发，鼓励回帖。但操作中离心后上层的氯仿应该都离心下去了，上层不应该还有氯仿的 2011-05-10 16:00:29
我个人觉得DNA存在于上层，分层的原因可能是还有氯仿杂质存在，希望对你有所帮助！
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2楼2011-05-10 15:56:36
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yuruoyuxue

木虫 (正式写手)
★
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jipojiong(金币+1): 离心后有白色的蛋白质层，在分层的界面之间。我吸取上层至新的离心管，加入异丙醇后静置一会出现了分层。一共是八管，有四管出现了这个现象。 2011-05-10 17:15:28
分层？异丙醇加入应该是一体的，DNA在上面的，现状的。我做实验的时候最下面的是多糖与蛋白质！
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6楼2011-05-10 16:22:36
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)
★
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Have you mixed the mixture well?
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8楼2011-05-10 21:09:16
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fwks

铁杆木虫 (小有名气)
★
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jipojiong(金币+1): 那个颜色要比酚的颜色深一些 2011-05-11 10:46:36
氯仿无色，只有酚才有颜色，因此可能是酚杂质溶解在有机相中所致。
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9楼2011-05-10 21:46:58
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)
★
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jipojiong(金币+5): 很受启发 2011-05-11 10:45:14
rainwander(EPI+1): 2011-05-11 22:41:48
如果没有混合均匀，确实是可能会分层的，一旦混合均匀后就成为均相了。如果不混合均匀，那么上相就是异丙醇，肯定是无色透明的，下相是含有DNA的溶液，也就是加入异丙醇之前是什么颜色，加入之后应该也还是什么颜色的，但我想楼主不会这么粗心吧？我百度了一下，有人用异丙醇，有人用乙醇，都出现过分相，但可惜那些页面里都没有提到问题是怎么解决的，我也没有遇到过分相的情况，所以也就不知道原因了。

由于现在我正在做双水相萃取，小分子的有机溶剂也能够和无机物成为双水相的，所以我觉得有可能（不一定符合楼主的情况），溶液中的无机盐浓度稍微高了些，超越了临界点，处于相图中曲线的上方，形成两相。就像附件里的这篇文章一样。

[ Last edited by 冼亮淀粉酶 on 2011-5-11 at 01:26 ]
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10楼2011-05-11 01:21:30
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yuruoyuxue

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
我想问一下，分层是像有机与无机溶剂混合的那种，还是说是上层澄清下层浑浊？
我试验中出现的后种情况。
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11楼2011-05-11 10:33:02
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jipojiong

木虫 (小有名气)
内容已删除
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12楼2011-05-11 10:48:53
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yuruoyuxue

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
Originally posted by jipojiong at 2011-05-11 10:48:53:
有点像 上层是水层 下层是氯仿 的那种感觉， 下层黄色 稍有浑浊

我想那就在实验中宁可多弃些上层的吧。应该会对实验上有帮助！
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13楼2011-05-11 21:37:52
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hongcosb

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
12楼: Originally posted by jipojiong at 2011-05-11 10:48:53
有点像 上层是水层 下层是氯仿 的那种感觉， 下层黄色 稍有浑浊...

不知问题解决了没有？我今天也出现了这种情况。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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14楼2015-10-06 19:39:50
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liuronglin3楼
2011-05-10 16:04   回复  
Zegg4楼
2011-05-10 16:04   回复  
引用回帖:
Originally posted by jipojiong at 2011-05-10 15:09:27: 采用直接提取法提取土壤基因组，具体操作方法可参照http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=3024619 中的步骤 问题是这样，加入0.6倍的异丙醇后，出现明显的分层现象，上层无色，下层淡黄色，请 ...

zyxme5楼
2011-05-10 16:12   回复  
jipojiong7楼
2011-05-10 17:18   回复  
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