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jipojiong

木虫 (小有名气)


[交流] 土壤总DNA提取步骤中,加入异丙醇后,静置,出现分层,求助高手

采用直接提取法提取土壤基因组,具体操作方法可参照http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=3024619
中的步骤

问题是这样,加入0.6倍的异丙醇后,出现明显的分层现象,上层无色,下层淡黄色,请问为什么分层,接下来该如何提取?

个人感觉下层应该是氯仿,但前面的步骤中离心后吸取上清并没有把下层的氯仿吸到呀。求助高手
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小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
Have you mixed the mixture well?
8楼2011-05-10 21:09:16
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jiajunhui

至尊木虫 (著名写手)



小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
jipojiong(金币+2): 沙发,鼓励回帖。但操作中离心后上层的氯仿应该都离心下去了,上层不应该还有氯仿的 2011-05-10 16:00:29
我个人觉得DNA存在于上层,分层的原因可能是还有氯仿杂质存在,希望对你有所帮助!
2楼2011-05-10 15:56:36
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yuruoyuxue

木虫 (正式写手)



小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
jipojiong(金币+1): 离心后有白色的蛋白质层,在分层的界面之间。我吸取上层至新的离心管,加入异丙醇后静置一会出现了分层。一共是八管,有四管出现了这个现象。 2011-05-10 17:15:28
分层?异丙醇加入应该是一体的,DNA在上面的,现状的。我做实验的时候最下面的是多糖与蛋白质!
6楼2011-05-10 16:22:36
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fwks

铁杆木虫 (小有名气)



小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
jipojiong(金币+1): 那个颜色要比酚的颜色深一些 2011-05-11 10:46:36
氯仿无色,只有酚才有颜色,因此可能是酚杂质溶解在有机相中所致。
9楼2011-05-10 21:46:58
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简单回复
jipojiong7楼
2011-05-10 17:18   回复  
Zegg4楼
2011-05-10 16:04   回复  
引用回帖:
Originally posted by jipojiong at 2011-05-10 15:09:27: 采用直接提取法提取土壤基因组,具体操作方法可参照http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=3024619 中的步骤 问题是这样,加入0.6倍的异丙醇后,出现明显的分层现象,上层无色,下层淡黄色,请 ...

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