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[求助]
DNA提取
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| 我提取土壤总ＤＮＡ，样品前处理时用ＰＢＳ（ｐＨ ８．０）洗涤土壤两次，我想请教一下具体的操作步骤，比如是将土壤用ＰＢＳ悬浮以后，离心吗？那离心的转速该怎么把握呢，要达到洗涤的目的又不担心土壤细菌ＤＮＡ不损失 |
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【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
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1、前期样品的洗涤 取约1g的土壤样品，用30ml 0.1M灭菌PBS缓冲液悬浮（加缓冲液时可以分批次加，每次涡旋3-5min，使样品均匀浑浊）。200*g离心5min，收集上清（菌体），弃去沉淀，次步重复3次。9000*g离心5min，弃去上清，收集沉淀（菌体），将上清移至另一离心管中。收集的菌体用30mlPBS缓冲液充分悬浮，9000*g离心5min。重复洗涤3次。最后将洗涤好的菌体悬浮在5ml的PBS缓冲液中，用枪吹打振荡混匀，平均分装至5个1.5mlEp管中，负二十摄氏度保存或直接用于DNA提取 2、DNA提取 这个要看你想怎么提了。可以自己配一些试剂提（如果实验室经费有限的话），也可以直接买试剂盒提，要更方便些。 |
2楼2012-08-16 17:22:38