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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 土壤总DNA提取步骤中，加入异丙醇后，静置，出现分层，求助高手
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jipojiong

木虫 (小有名气)

[交流] 土壤总DNA提取步骤中，加入异丙醇后，静置，出现分层，求助高手

采用直接提取法提取土壤基因组，具体操作方法可参照http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=3024619
中的步骤

问题是这样，加入0.6倍的异丙醇后，出现明显的分层现象，上层无色，下层淡黄色，请问为什么分层，接下来该如何提取？

个人感觉下层应该是氯仿，但前面的步骤中离心后吸取上清并没有把下层的氯仿吸到呀。求助高手
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1楼 2011-05-10 15:09:27
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yuruoyuxue

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
Originally posted by jipojiong at 2011-05-11 10:48:53:
有点像 上层是水层 下层是氯仿 的那种感觉， 下层黄色 稍有浑浊

我想那就在实验中宁可多弃些上层的吧。应该会对实验上有帮助！
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13楼2011-05-11 21:37:52
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jiajunhui

至尊木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
jipojiong(金币+2): 沙发，鼓励回帖。但操作中离心后上层的氯仿应该都离心下去了，上层不应该还有氯仿的 2011-05-10 16:00:29
我个人觉得DNA存在于上层，分层的原因可能是还有氯仿杂质存在，希望对你有所帮助！
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2楼2011-05-10 15:56:36
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yuruoyuxue

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
jipojiong(金币+1): 离心后有白色的蛋白质层，在分层的界面之间。我吸取上层至新的离心管，加入异丙醇后静置一会出现了分层。一共是八管，有四管出现了这个现象。 2011-05-10 17:15:28
分层？异丙醇加入应该是一体的，DNA在上面的，现状的。我做实验的时候最下面的是多糖与蛋白质！
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6楼2011-05-10 16:22:36
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
Have you mixed the mixture well?
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8楼2011-05-10 21:09:16
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Zegg4楼
2011-05-10 16:04   回复  
引用回帖:
Originally posted by jipojiong at 2011-05-10 15:09:27: 采用直接提取法提取土壤基因组，具体操作方法可参照http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=3024619 中的步骤 问题是这样，加入0.6倍的异丙醇后，出现明显的分层现象，上层无色，下层淡黄色，请 ...

jipojiong7楼
2011-05-10 17:18   回复  
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