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jipojiong

木虫 (小有名气)

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帖子: 299
在线: 100.7小时
虫号: 907876

[交流] 土壤总DNA提取步骤中，加入异丙醇后，静置，出现分层，求助高手

采用直接提取法提取土壤基因组，具体操作方法可参照http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=3024619
中的步骤

问题是这样，加入0.6倍的异丙醇后，出现明显的分层现象，上层无色，下层淡黄色，请问为什么分层，接下来该如何提取？

个人感觉下层应该是氯仿，但前面的步骤中离心后吸取上清并没有把下层的氯仿吸到呀。求助高手

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1楼 2011-05-10 15:09:27

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
jipojiong(金币+5): 很受启发 2011-05-11 10:45:14
rainwander(EPI+1): 2011-05-11 22:41:48

如果没有混合均匀，确实是可能会分层的，一旦混合均匀后就成为均相了。如果不混合均匀，那么上相就是异丙醇，肯定是无色透明的，下相是含有DNA的溶液，也就是加入异丙醇之前是什么颜色，加入之后应该也还是什么颜色的，但我想楼主不会这么粗心吧？我百度了一下，有人用异丙醇，有人用乙醇，都出现过分相，但可惜那些页面里都没有提到问题是怎么解决的，我也没有遇到过分相的情况，所以也就不知道原因了。

由于现在我正在做双水相萃取，小分子的有机溶剂也能够和无机物成为双水相的，所以我觉得有可能（不一定符合楼主的情况），溶液中的无机盐浓度稍微高了些，超越了临界点，处于相图中曲线的上方，形成两相。就像附件里的这篇文章一样。

[ Last edited by 冼亮淀粉酶 on 2011-5-11 at 01:26 ]

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