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土壤总DNA提取步骤中,加入异丙醇后,静置,出现分层,求助高手
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jipojiong
木虫
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帖子: 299
在线: 100.7小时
虫号: 907876
[交流]
土壤总DNA提取步骤中,加入异丙醇后,静置,出现分层,求助高手
采用直接提取法提取土壤基因组,具体操作方法可参照
http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=3024619
中的步骤
问题是这样,加入0.6倍的异丙醇后,出现明显的分层现象,上层无色,下层淡黄色,请问为什么分层,接下来该如何提取?
个人感觉下层应该是氯仿,但前面的步骤中离心后吸取上清并没有把下层的氯仿吸到呀。求助高手
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2011-05-10 15:09:27
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小木虫(金币
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):给个红包,谢谢回帖
jipojiong(金币+5): 很受启发 2011-05-11 10:45:14
rainwander(EPI+1): 2011-05-11 22:41:48
如果没有混合均匀,确实是可能会分层的,一旦混合均匀后就成为均相了。如果不混合均匀,那么上相就是异丙醇,肯定是无色透明的,下相是含有DNA的溶液,也就是加入异丙醇之前是什么颜色,加入之后应该也还是什么颜色的,但我想楼主不会这么粗心吧?我百度了一下,有人用异丙醇,有人用乙醇,都出现过分相,但可惜那些页面里都没有提到问题是怎么解决的,我也没有遇到过分相的情况,所以也就不知道原因了。
由于现在我正在做双水相萃取,小分子的有机溶剂也能够和无机物成为双水相的,所以我觉得有可能(不一定符合楼主的情况),溶液中的无机盐浓度稍微高了些,超越了临界点,处于相图中曲线的上方,形成两相。就像附件里的这篇文章一样。
[
Last edited by 冼亮淀粉酶 on 2011-5-11 at 01:26
]
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10楼
2011-05-11 01:21:30
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