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yoyoyoyo3985金虫 (小有名气)
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为什么我做的酶切连接总是不长斑呢？
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我的目标DNA现在是上到了T载体上，两端都加了酶切位点的。现在做的是将DNA双酶切回收，然后与双酶切回收的表达载体连接、转化。表达载体是有amp抗性的，可是做了几次，板子上都没有斑长出来。求各位大侠给予指点啊。 说明：酶切应该没问题的，因为胶回收的时候明显是分为两条带了，DNA的浓度也不错，感受态用空载体转化的生长状况也正常，难道是T4连接酶的问题吗？ 我用的酶说明上是22度10min-1h。我都是连了数小时 |
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雪山飞狐7233
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18楼2011-05-10 17:43:42