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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 蓝白斑筛选问题
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chenbz

银虫 (初入文坛)

[求助] 蓝白斑筛选问题

最近做蓝白斑筛选，平板上长出来的白色菌落很小，而且蓝斑特别多，有的白班仔细看也略带一点蓝色，这究竟是怎么回事，该怎么解决？
我的目的片段是514bp，平板上涂布了60ul的菌液，长出来的菌落特小且很密集。而且我与同学是同时做的，只不过是样品不一样，也就是说我们的实验条件是一样的，同样的感受态，同样的X-gal和IPTG，连接试剂盒也一样（promega的），但是我同学的平板，白班长的很大，蓝斑也少，我的就不知道是怎么回事了？
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干一行爱一行，方能有所施展；做一事成一事，乃为有用之才！
1楼 2011-04-29 11:06:45
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ddrflying

金虫 (正式写手)
是不是菌液太浓了？
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3楼2011-04-29 13:50:00
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老夏853

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

涂60ul 菌液，体积太少，不可能涂匀，你的菌落基本上就长在板子滴菌液的地方吧，这样是长的比较小，我觉得可能是营养物质供给不足引起的。我们划线的时候就很明显啊，最后的单菌落往往长的比较大而菌落密集的地方就长的小一些。
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4楼2011-04-30 09:38:52
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liujianmin68

木虫 (职业作家)

努力发展交叉学科

【答案】应助回帖

从你的描述可以看出，你们的感受态浓度很高，在进行微生物培养时，如果再培养基上出现的菌落个数太多，每个菌落就会因为培养基的原因而生长的较小，所以你涂平板时可以稀释一下涂，或者选择更少的体积涂。
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转向地质微生物学
5楼2011-04-30 10:59:09
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ben1147

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

chenbz(金币+2): 谢谢哦，我先试试看！ 2011-05-03 10:51:52
这个时候就显出空白对照的作用了啊
拿空载体做个转化看看，要是白多蓝少，那就是载体自连；要是一样的蓝多白少，那就是载体本身没切完全
至于那菌长得密集，明显是没涂匀
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6楼2011-05-01 18:38:03
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