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chenbz

银虫 (初入文坛)

[求助] 蓝白斑筛选问题

最近做蓝白斑筛选,平板上长出来的白色菌落很小,而且蓝斑特别多,有的白班仔细看也略带一点蓝色,这究竟是怎么回事,该怎么解决?
我的目的片段是514bp,平板上涂布了60ul的菌液,长出来的菌落特小且很密集。而且我与同学是同时做的,只不过是样品不一样,也就是说我们的实验条件是一样的,同样的感受态,同样的X-gal和IPTG,连接试剂盒也一样(promega的),但是我同学的平板,白班长的很大,蓝斑也少,我的就不知道是怎么回事了?
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干一行爱一行,方能有所施展;做一事成一事,乃为有用之才!
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ddrflying

金虫 (正式写手)

是不是菌液太浓了?
3楼2011-04-29 13:50:00
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老夏853

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

涂60ul 菌液,体积太少,不可能涂匀,你的菌落基本上就长在板子滴菌液的地方吧,这样是长的比较小,我觉得可能是营养物质供给不足引起的。我们划线的时候就很明显啊,最后的单菌落往往长的比较大而菌落密集的地方就长的小一些。
4楼2011-04-30 09:38:52
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liujianmin68

木虫 (职业作家)

努力发展交叉学科

【答案】应助回帖

从你的描述可以看出,你们的感受态浓度很高,在进行微生物培养时,如果再培养基上出现的菌落个数太多,每个菌落就会因为培养基的原因而生长的较小,所以你涂平板时可以稀释一下涂,或者选择更少的体积涂。
转向地质微生物学
5楼2011-04-30 10:59:09
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ben1147

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

chenbz(金币+2): 谢谢哦,我先试试看! 2011-05-03 10:51:52
这个时候就显出空白对照的作用了啊
拿空载体做个转化看看,要是白多蓝少,那就是载体自连;要是一样的蓝多白少,那就是载体本身没切完全
至于那菌长得密集,明显是没涂匀
6楼2011-05-01 18:38:03
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