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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

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【答案】应助回帖

★ ★
reasonspare(金币+2, EPI+1): 谢谢分享 2011-04-28 11:16:49
ltakashi(金币+1): 2011-06-02 20:49:49

1:首先长的慢是正常的，你这是双抗，但是如果超过24h，基本就没有连接上可能了。。2：不知道你有没有筛选标记呢?比如说蓝白斑？
3：其实连接这个东东跟很多因素都是有关系的：
  3.1：首先是你的质粒双酶切是否彻底，是否切的干净，你的基因也是不是双酶切得彻底？
  3.2:连接体系的问题，一般呢，我们是10ul体系，基因要比载体多一些，这个你要跑胶定量的。。。还有连接时间的问题，过夜连接，10---14h都可以；
  3.3：你的感受态细胞活性如何？一般转DH5呢，应该没有什么问题。
  3.4：培养基抗生素呢？浓度是否合适？

如果做了几次都没有什么结果，那么换体系，换条件。。。。

BLESS