| 查看: 1227 | 回复: 3 | |||||
| 本帖产生 1 个 BioEPI ，点击这里进行查看 | |||||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||||
[求助]
我用的是pMAL-m2载体，片段大小连不上！
|
|||||
|
我的片段大小是2000bp左右， 用的是Hind III和BamH I两个酶切位点，双酶切回收都有我的目的条带！ 我涂的板子是LB+Amp+Kan 用的连接酶是T4 DNA连接酶！ 长了一夜，没迹象！ 连接到这个载体上转化DH5是不是都长得慢些？ |
回复此楼» 猜你喜欢
某些机构，以效率低为荣，以效率低作为存在感
已经有10人回复
-
今天务委会开完了，明天出结果吗
已经有11人回复
-
有没有大神帮我看看基金代码
已经有9人回复
-
2026国自然函评费到账
已经有23人回复
-
在坚冰还盖着北海的时候，我看到了怒放的梅花。
已经有8人回复
-
今日不放榜？网传国自然预计 8 月 27 日可查结果
已经有22人回复
-
放榜前的不淡定
已经有18人回复
-
什么时候开奖？
已经有13人回复
-
如果此刻你正在为国基感到焦虑，不妨来听听这首《基金之外》
已经有8人回复
-
没有任何消息-是不是就凉了
已经有10人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 大片段PCR扩增求助
已经有34人回复
- 药物载体是用纳米粒子好还是微米粒子好啊
已经有17人回复
- 载体构建技术请教，如何设计引物提取基因插入载体中？
已经有3人回复
- 载体连接pcr片段一直连不上
已经有17人回复
- PCR产物与T载体连不上 求助
已经有29人回复
- 【求助/交流】pYES2 载体构建表达方向的问题
已经有8人回复
- 【求助/交流】xho1单酶切，总连不上(片段3K,载体5K)
已经有8人回复
- 【求助】固体分散体 水溶性载体 PEG1500
已经有6人回复
天使托
专家顾问 (职业作家)
T.Shen
-
专家经验: +57 - BioEPI: 17
- 应助: 95 (初中生)
- 贵宾: 0.263
- 金币: 16299.3
- 散金: 593
- 红花: 74
- 沙发: 9
- 帖子: 3659
- 在线: 290.6小时
- 虫号: 441757
- 注册: 2007-10-27
- 专业: 微生物生理与生物化学
- 管辖: 微生物
【答案】应助回帖
★ ★
reasonspare(金币+2, EPI+1): 谢谢分享 2011-04-28 11:16:49
ltakashi(金币+1): 2011-06-02 20:49:49
reasonspare(金币+2, EPI+1): 谢谢分享 2011-04-28 11:16:49
ltakashi(金币+1): 2011-06-02 20:49:49
|
1:首先长的慢是正常的，你这是双抗，但是如果超过24h，基本就没有连接上可能了。。2：不知道你有没有筛选标记呢?比如说蓝白斑？ 3：其实连接这个东东跟很多因素都是有关系的： 3.1：首先是你的质粒双酶切是否彻底，是否切的干净，你的基因也是不是双酶切得彻底？ 3.2:连接体系的问题，一般呢，我们是10ul体系，基因要比载体多一些，这个你要跑胶定量的。。。还有连接时间的问题，过夜连接，10---14h都可以； 3.3：你的感受态细胞活性如何？一般转DH5呢，应该没有什么问题。 3.4：培养基抗生素呢？浓度是否合适？ 如果做了几次都没有什么结果，那么换体系，换条件。。。。 BLESS |
3楼2011-04-28 10:45:01
yabxxh
木虫 (正式写手)
- BioEPI: 11
- 应助: 22 (小学生)
- 贵宾: 0.005
- 金币: 2238
- 散金: 98
- 红花: 9
- 帖子: 465
- 在线: 88.6小时
- 虫号: 157001
- 注册: 2006-01-05
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
2楼2011-04-28 10:12:42
yabxxh
木虫 (正式写手)
- BioEPI: 11
- 应助: 22 (小学生)
- 贵宾: 0.005
- 金币: 2238
- 散金: 98
- 红花: 9
- 帖子: 465
- 在线: 88.6小时
- 虫号: 157001
- 注册: 2006-01-05
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
4楼2011-04-28 11:57:38
28