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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 请教分析RNA电泳图
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dhmdddd

木虫 (正式写手)

[求助] 请教分析RNA电泳图

新手啊，第一次提RNA，全部降解掉了，昨天第二次，总算是提出来了很是丑，但是还不要见笑……条带很暗，但是下边有一条带很亮，是蛋白质吗？我提的是大肠杆菌，一般菌体量要多少啊？请高手指教，先谢过了！！上图！！
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上班族，学习ing……
1楼 2011-04-26 09:12:17
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jhu132llh

荣誉版主 (知名作家)

大洪
★ ★
reasonspare(金币+2): 谢谢分享 2011-04-26 11:14:00
鼓励一下
谁都是从这个阶段开始的
万事开头难
加油
你会越来越NB的

下面的带如果你狠标准的按试剂盒老做的话
是蛋白的可能性不是很大
还是有可能是降解的RNA
虽然这话有点伤你的心
但是它确实有可能是降解的RNA
下一步要怎么样来防止RNA降解
如：枪头离心管什么要特别处理
提取的时候要带口罩
实验中注意仪器温度，RNA要存放在冰上并及时转移至-80冰箱等等
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青春的岁月，我们身不由己，只因这胸中燃烧的梦想！
2楼2011-04-26 09:39:38
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mamadexiao

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
dhmdddd(金币+2): 恩，十分感谢帮助，后面再提的话就知道了！ 2011-04-26 11:07:22
lstt09nk(金币+2): 鼓励交流 2011-04-26 22:23:33
下面很亮的带是降解掉的RNA吧
上面有两条弱弱的带,是28S和18S
自己用的提RNA的东西要注意,不用商品化的无RNASE的,就用DEPC处理吧
溶的时候也要注意,都要是无RNASE 的水...
还有就是操作了吧,该低温的要低温...
没了~~~
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3楼2011-04-26 09:57:06
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elvias

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
dhmdddd(金币+1): 谢谢！ 2011-04-26 12:53:47
lstt09nk(金币+1): 感谢参与 2011-04-26 22:23:49
你的RNA都降解了，28S和18S很弱。你的操作还是有问题，器材或者试剂有RNA酶。还有蛋白不会跑到琼脂糖凝胶中，一般只会留在点样孔中。
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4楼2011-04-26 12:28:32
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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
dhmdddd(金币+1): 谢谢！ 2011-04-26 12:56:55
lstt09nk(金币+1): 鼓励交流，欢迎常来 2011-04-26 22:24:12
下面最亮的应该是5S,23S的亮度是16S亮度的两倍时质量比较好，但是比较难。一般只要5S不是很亮，16S和23S的亮度差不多就行了。大肠的话50ml的菌液我觉得就够了。
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5楼2011-04-26 12:32:16
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dhmdddd

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by elvias at 2011-04-26 12:28:32:
你的RNA都降解了，28S和18S很弱。你的操作还是有问题，器材或者试剂有RNA酶。还有蛋白不会跑到琼脂糖凝胶中，一般只会留在点样孔中。

我们这边i没有专门提RNA的台子，所以就是在我们用的超净台里面做的，之前有拿75%的乙醇喷了一下，想着会好一点……枪头离心管什么的都拿DEPC泡过的，打开一次后又重新121度灭了30分钟，后面的话我 小心一点，感谢！
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上班族，学习ing……
6楼2011-04-26 12:55:55
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dhmdddd

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by zhuifeng7000 at 2011-04-26 12:32:16:
下面最亮的应该是5S,23S的亮度是16S亮度的两倍时质量比较好，但是比较难。一般只要5S不是很亮，16S和23S的亮度差不多就行了。大肠的话50ml的菌液我觉得就够了。

我是10ml的菌液分了十管，之后就每管加试剂提了，后来也考虑到菌体量的原因了，你们的50ml分几管？现在看来还是降解比较厉害啊，后面再提的话我再把菌体量加大一点，感谢！
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上班族，学习ing……
7楼2011-04-26 12:59:50
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linanyang

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
silicare(金币+10): 处女帖，鼓励发帖交流，欢迎常来生物综合版 2011-05-16 11:59:28
我最近也遇到这种情况啊，纠结中，共勉吧。加油！！
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8楼2011-05-15 20:26:14
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睡着数绵羊

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
silicare(金币+1): 鼓励发帖交流，欢迎常来生物综合版 2011-05-16 11:59:40
dhmdddd(金币+1): 这个装DEPC水的那个没有用DEPC泡，下次再试试看了，谢了！ 2011-05-17 12:39:14
这个都要注意下细节问题：
1，装DEPC水的瓶子有没有用DEPC水泡
2，跑胶的时候枪头是不是用泡过的枪头吸的
现在就想到这2个方面。
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9楼2011-05-16 10:37:58
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rioarsenal

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
silicare(金币+1): 鼓励发帖交流，欢迎常来生物综合版 2011-05-16 11:59:54
前面的是降解的小分子RNA，质量不太好，重来吧。
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10楼2011-05-16 10:40:43
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