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dhmdddd

木虫 (正式写手)

[求助] 请教分析RNA电泳图

新手啊,第一次提RNA,全部降解掉了,昨天第二次,总算是提出来了很是丑,但是还不要见笑……条带很暗,但是下边有一条带很亮,是蛋白质吗?我提的是大肠杆菌,一般菌体量要多少啊?请高手指教,先谢过了!!上图!!
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上班族,学习ing……
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jhu132llh

荣誉版主 (知名作家)

大洪

★ ★
reasonspare(金币+2): 谢谢分享 2011-04-26 11:14:00
鼓励一下
谁都是从这个阶段开始的
万事开头难
加油
你会越来越NB的

下面的带如果你狠标准的按试剂盒老做的话
是蛋白的可能性不是很大
还是有可能是降解的RNA
虽然这话有点伤你的心
但是它确实有可能是降解的RNA
下一步要怎么样来防止RNA降解
如:枪头离心管什么要特别处理
提取的时候要带口罩
实验中注意仪器温度,RNA要存放在冰上并及时转移至-80冰箱等等
青春的岁月,我们身不由己,只因这胸中燃烧的梦想!
2楼2011-04-26 09:39:38
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mamadexiao

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
dhmdddd(金币+2): 恩,十分感谢帮助,后面再提的话就知道了! 2011-04-26 11:07:22
lstt09nk(金币+2): 鼓励交流 2011-04-26 22:23:33
下面很亮的带是降解掉的RNA吧
上面有两条弱弱的带,是28S和18S
自己用的提RNA的东西要注意,不用商品化的无RNASE的,就用DEPC处理吧
溶的时候也要注意,都要是无RNASE 的水...
还有就是操作了吧,该低温的要低温...
没了~~~
3楼2011-04-26 09:57:06
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elvias

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


dhmdddd(金币+1): 谢谢! 2011-04-26 12:53:47
lstt09nk(金币+1): 感谢参与 2011-04-26 22:23:49
你的RNA都降解了,28S和18S很弱。你的操作还是有问题,器材或者试剂有RNA酶。还有蛋白不会跑到琼脂糖凝胶中,一般只会留在点样孔中。
4楼2011-04-26 12:28:32
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zhuifeng7000

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


dhmdddd(金币+1): 谢谢! 2011-04-26 12:56:55
lstt09nk(金币+1): 鼓励交流,欢迎常来 2011-04-26 22:24:12
下面最亮的应该是5S,23S的亮度是16S亮度的两倍时质量比较好,但是比较难。一般只要5S不是很亮,16S和23S的亮度差不多就行了。大肠的话50ml的菌液我觉得就够了。
5楼2011-04-26 12:32:16
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dhmdddd

木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by elvias at 2011-04-26 12:28:32:
你的RNA都降解了,28S和18S很弱。你的操作还是有问题,器材或者试剂有RNA酶。还有蛋白不会跑到琼脂糖凝胶中,一般只会留在点样孔中。

我们这边i没有专门提RNA的台子,所以就是在我们用的超净台里面做的,之前有拿75%的乙醇喷了一下,想着会好一点……枪头离心管什么的都拿DEPC泡过的,打开一次后又重新121度灭了30分钟,后面的话我 小心一点,感谢!
上班族,学习ing……
6楼2011-04-26 12:55:55
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dhmdddd

木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by zhuifeng7000 at 2011-04-26 12:32:16:
下面最亮的应该是5S,23S的亮度是16S亮度的两倍时质量比较好,但是比较难。一般只要5S不是很亮,16S和23S的亮度差不多就行了。大肠的话50ml的菌液我觉得就够了。

我是10ml的菌液分了十管,之后就每管加试剂提了,后来也考虑到菌体量的原因了,你们的50ml分几管?现在看来还是降解比较厉害啊,后面再提的话我再把菌体量加大一点,感谢!
上班族,学习ing……
7楼2011-04-26 12:59:50
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linanyang

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
silicare(金币+10): 处女帖,鼓励发帖交流,欢迎常来生物综合版 2011-05-16 11:59:28
我最近也遇到这种情况啊,纠结中,共勉吧。加油!!
8楼2011-05-15 20:26:14
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睡着数绵羊

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


silicare(金币+1): 鼓励发帖交流,欢迎常来生物综合版 2011-05-16 11:59:40
dhmdddd(金币+1): 这个装DEPC水的那个没有用DEPC泡,下次再试试看了,谢了! 2011-05-17 12:39:14
这个都要注意下细节问题:
1,装DEPC水的瓶子有没有用DEPC水泡
2,跑胶的时候枪头是不是用泡过的枪头吸的
现在就想到这2个方面。
9楼2011-05-16 10:37:58
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rioarsenal

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


silicare(金币+1): 鼓励发帖交流,欢迎常来生物综合版 2011-05-16 11:59:54
前面的是降解的小分子RNA,质量不太好,重来吧。
10楼2011-05-16 10:40:43
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