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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 提取大肠杆菌质粒失败的原因
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y_ylili

铁虫 (初入文坛)

[求助] 提取大肠杆菌质粒失败的原因

用碱裂解法发提取大肠杆菌质粒DNA~加入异丙醇之后有大量的絮状物，离心后沉淀很少，乙醇洗涤，干燥，跑胶的居然没有亮带？！已经做了3次~十几管了~呜~纠结....求助....
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时间生物学
1楼 2011-04-24 16:45:28
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y_ylili

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by y_ylili at 2011-04-24 16:45:28:
用碱裂解法发提取大肠杆菌质粒DNA~加入异丙醇之后有大量的絮状物，离心后沉淀很少，乙醇洗涤，干燥，跑胶的居然没有亮带？！已经做了3次~十几管了~呜~纠结....求助....

只是做一个验证，所以粗糙了些....下边是实验步骤：
菌液离心弃上清>加1液（Tris-Cl  EDTA）>加2液（SDS  NaOH）混匀冰浴>加3液（中和液）>加酚/氯仿/异戊醇>取上清（不够细心，偶尔取到中层，多数都没取到中层）>异丙醇离心弃上清>乙醇洗涤（有的沉淀在这步给弄丢了）>干燥加TE....
莪新手....操作问题很大~~~~(>_<~~~~
望指导....
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时间生物学
9楼2011-04-25 13:53:30
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): good 2011-04-25 09:51:35
y_ylili(金币+1): (～ o ～)~zZ 2011-04-26 18:00:52
“加入异丙醇之后有大量的絮状物”这个是蛋白质吧。抽提之后，你取上清取到中间相的蛋白质啦。
你把详细步骤发上来，大家才好帮你分析哦。
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2楼2011-04-24 17:17:57
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lixg

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

楼上正解，吸到中间层了。
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3楼2011-04-24 17:34:02
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yuxia82012

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

用试剂盒吧，呵呵，算算成本其实差不多的还比较稳定
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在等待中涅槃重生
4楼2011-04-24 18:14:31
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