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y_ylili

铁虫 (初入文坛)

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[求助] 提取大肠杆菌质粒失败的原因

用碱裂解法发提取大肠杆菌质粒DNA~加入异丙醇之后有大量的絮状物，离心后沉淀很少，乙醇洗涤，干燥，跑胶的居然没有亮带？！已经做了3次~十几管了~呜~纠结....求助....

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时间生物学

1楼2011-04-24 16:45:28

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y_ylili

铁虫 (初入文坛)

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引用回帖:

Originally posted by y_ylili at 2011-04-24 16:45:28:
用碱裂解法发提取大肠杆菌质粒DNA~加入异丙醇之后有大量的絮状物，离心后沉淀很少，乙醇洗涤，干燥，跑胶的居然没有亮带？！已经做了3次~十几管了~呜~纠结....求助....

只是做一个验证，所以粗糙了些....下边是实验步骤：
菌液离心弃上清>加1液（Tris-Cl EDTA）>加2液（SDS NaOH）混匀冰浴>加3液（中和液）>加酚/氯仿/异戊醇>取上清（不够细心，偶尔取到中层，多数都没取到中层）>异丙醇离心弃上清>乙醇洗涤（有的沉淀在这步给弄丢了）>干燥加TE....
莪新手....操作问题很大~~~~(>_<