应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 感受态的制备及转化？
21/1返回列表
查看: 2901  |  回复: 13
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 2 个 MolEPI ，点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

yanying198

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
西瓜(金币+2): 鼓励！把Buffer I和Buffer II的配方交出来就给你EPI ^_^ 2011-04-22 16:44:12
西瓜:编辑内容 2011-04-22 19:09
西瓜(金币+2, EPI+1): 鼓励分享 2011-04-22 19:10:50
西瓜:编辑内容 2011-04-22 19:11
我们使用超级感受态做转化，传给你你可以借鉴一下

        （1）将-70℃保存的E.coli JM109于LB平板上划线，37℃培养过夜。
        （2）挑接单克隆于LB液体试管（5 mL，Amp浓度为100 μg/mL），37℃ 200 rpm培养过夜。
        （3）将上述培养菌液按4%比例转接新鲜的LB液体培养基，37℃，250 rpm培养至OD值约为0.8。
        （4）将菌液立即置于冰上10 min，4℃，4000 rpm离心10 min，收集菌体。
        （5）加1/5原菌液体积的Buffer I，冰浴10 min，4℃，4000 rpm离心10 min。
        （6）完全去上清，按原菌液体积的1/40～1/20加入Buffer II，分装100 μL/1.5 mL离心管（可放置-70℃冰箱保存备用）。

Buffer I: 30 mM KAC；100 mM KCl；10 mM CaCl2·2H2O；50 mM MnCl2；15%甘油；乙酸调pH 5.8，过滤除菌；
Buffer II: 10 mM MOPS；10 mM KCl；75 mM CaCl2·2H2O；15% 甘油；NaOH调pH 6.8，过滤除菌；

[ Last edited by 西瓜 on 2011-4-22 at 19:11 ]
赞一下(2人) 回复此楼
6楼2011-04-22 16:34:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

智能机器人

Robot (super robot)

我们都爱小木虫

找到一些相关的精华帖子，希望有用哦~

科研从小木虫开始，人人为我，我为人人

冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

1949stone(EPI+1): epi来也 2011-04-22 20:52:02
1、楼主培养细胞的时候转接培养三次，引入受污染隐患。
2、楼主没有试过用氯化镁处理。
3、感受态细胞分装到EP管中的时候，EP管要预冷，分装好之后要放在冰中，一直到放到冰箱里保存都不该升温。
4、感受态保存所用的溶液没有加甘油，细胞放久了会死掉。
5、热激之后放置在冰里并不只是为了冷却，还要等待细胞壁修复。
6、6楼所用的E.coli JM109是不是已经有了质粒，不然为什么能抗Amp？我们不用E.coli JM109作表达菌株，里面是没有西游密码子质粒的，做完了感受态之后要接种到含有Amp的LB中看长不长，如果能长就是感受态制作失败了。不知道6楼实验室是怎么使用E.coli JM109的，我只是奇怪，没有针对6楼的意思。
赞一下(2人) 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

风车少年
流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
10楼2011-04-22 19:55:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 niuniu2010 的主题更新
21/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭