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yuliansheng

金虫 (小有名气)

[求助] 在基因重组过程中,怎样鉴别质粒载体是否被限制性内切酶切好?

各位高手们,
                如题,做怎样的实验才能进行鉴别用来重组基因的质粒是否被限制性内切酶切好?有人曾告诉我用连接酶来进行鉴别,把切了的(已用碱性磷酸酶去磷酸化)和没切的的质粒分别进行连接酶连接,然后导入感受细菌,培养。最后结果应该是一个长出细菌来了,一个没长出来,说明酶切成功。高手们能具体给我解释一下吗?其他的方法有没有?还有,就是关于基因重组这块的知识,想多了解一些。请高手们帮我解答,谢谢谢谢了!
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Haibara_Ai

铜虫 (小有名气)

如果酶还可以,就不要切太久,我用NEB的一般就切40-90min,不同酶出star reaction时间不同(当然也和浓度环境有关),有的超过半小时就会有。
如果割胶或者片段来自PCR,切不完全没啥大不了的
11楼2013-02-03 22:38:33
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