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冼亮淀粉酶

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生物大分子降解酶

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
silicare(金币+5, EPI+1): 2011-04-21 08:35:54

ladder跑得好，说明电泳胶、电泳液、电压电流没问题，给我的感觉是
1、拖带
样品中整个泳道都看不出明显的单条蛋白质带，说明有可能样品的制备有问题。
2、形状
样品中即使是拖带，从加样孔到后面，形状也不是呈倒梯形，而是中间有突出，所以我猜测可能有蛋白质样品在内，而且不止是一种蛋白质。
3、上样量
考马斯亮蓝染色还是比较敏感的，这么蓝，说明可能蛋白质很多，建议做一个上样量梯度，可以将样品进行2倍为一个梯度，做几个稀释梯度再上样跑，看看会不会有蛋白质条带。
4、样品处理
我跑SDS-PAGE从来不煮，所以我觉得不煮也没关系，反正已经有SDS了，但是稳妥起见，还是煮了算了，起码减少一个不确定因素。
5、浪费
一块胶10个上样孔，你有五个没用上，下次设计严谨一些，总会有些有趣的东西可以一起跑的。

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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。

3楼2011-04-20 22:22:55

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【答案】应助回帖

★ ★ ★
silicare(金币+3, EPI+1): 鼓励新虫参与 2011-06-27 12:01:13

引用回帖:

Originally posted by 化工人2010 at 2011-04-20 20:55:00:
SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳的电压、电流与跑电泳时间怎么确定啊，恒压还是恒流浓缩胶和分离胶浓度由什么决定啊
我做的是羊毛的溶解，附件是我的羊毛蛋白的电泳图条件：分离胶15%, 浓缩胶5%, 垂直平板电泳, 加样 ...

marker跑的还是很不错的，我觉得1.可能是样品处理有问题，有拖尾现象，可能是样品里有小的不溶物，处理的时候先沸水煮5分钟，然后再离心5分钟。2.你的样品浓度是不有些大，上样量和浓度有关，一般是V=13/C。3.即使你没有那么多样，泳道也不要空着，空的泳道用水代替样品来跑。4.我觉得可能你的电压稍稍有点大。

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7楼2011-06-27 09:09:46

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