应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 存档旧帖 » 线性化及完整的质粒电泳问题。
汕头大学海洋科学接受调剂
241/3返回列表123下一页
查看: 3900  |  回复: 23
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看

111602

木虫 (著名写手)

[交流] 线性化及完整的质粒电泳问题。 已有8人参与

最近在做实验过程中，遇到要将质粒先线性化，发现用酶切后电泳，与未酶切的质粒相比，跑的速度要快，不知是何原因，这些质粒都非空载，有些不理解，一般线性后跑的速度应该比超螺旋快才对啊。请高手指教！

首先感谢各位的讨论和建议。但必须说明一点，这个质粒是重组的，而且选择的酶只有一个酶切位点，电泳用的是1% AGAROSE GEL. 120V  30MIN.并且可以肯定已经被线性化的了。因为后继实验如果没有被线性化是无法成功的。


大家的回答都是建立在理论分析基础上的。我也赞同这一理论，但不知道有没有真正做过这一实验的朋友，可能我的实验（电泳）出了问题，但希望有实践经验的朋友给点意见。

[ Last edited by 111602 on 2011-4-21 at 01:42 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-04-20 08:28:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

xiaoweiwei121

荣誉版主 (文坛精英)

这潭水蓝的深邃

优秀区长优秀区长优秀版主优秀版主
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
西瓜(金币+5, EPI+1): 太牛了！实践是检验真理的唯一标准哦！话说区长MM睡这么晚会长痘痘滴…… 2011-04-21 23:38:07
这个可不一定，也不要在什么情况下都说超螺旋跑的快，首先要搞清楚它为什么会跑的快，他有他的决定因素。并不是在任何情况下都是这样的。我们不是在比拼理论知识，而是为了解决我们试验中确实存在问题，我做过类似的
线性跑的比超螺旋要快
建议楼主换个0.7-0.8%胶跑一下看看（浓度一定要准哦），电压不用太高，看看结果如何，然后我们再来讨论
曾经看过一个解释：胶浓度小，则孔径大，超螺旋的跑的阻力小，就快些。而胶浓度大，则孔径小，超螺旋的跑的阻力大，就慢些。而线性片段的快慢与分子量有关，不受浓度的影响。 超螺旋的速度是可以变化的，与胶浓度有关，与分子量无关。
超螺旋的速度还和凝胶中的EB有关系（如果你没加的，那就算了）

我的一个实验图片，哪个是酶切的，哪个是质粒对照楼主应该能看出来
胶的浓度大于1%


[ Last edited by xiaoweiwei121 on 2011-4-21 at 03:27 ]
赞一下(6人) 回复此楼
18楼2011-04-21 03:04:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

111602

木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by 天使托 at 2011-04-20 09:02:49:
线性化以后应该跑的慢吧？应该比环状的大一些

这个可未必，也看到好多人反映这个问题。不知道有实际做过的没有。
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2011-04-20 09:14:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
1949stone(金币+2): 继续鼓励 看了 您说的对 2011-04-20 11:22:27
1949stone: 我也没理解 那个问题 哈哈脸红ing 2011-04-20 11:23:35
引用回帖:
Originally posted by xuguanghai at 2011-04-20 10:49:36:
http://zhidao.baidu.com/question/217768279.html?an=0&si=1

此链接说的不无道理，首先明确的是超螺旋是跑的最快的，可是线性和环状相比谁快一点，个人还是认为开环的跑得快。。。

详情请参见
基因操作原理第六版（Principles of Gene Manipulation）
瞿礼嘉 顾红雅 译
第45--47页
赞一下(4人) 回复此楼
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
9楼2011-04-20 11:03:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
dhd997(金币+2): 有道理 2011-04-20 09:38:50
线性化以后应该跑的慢吧？应该比环状的大一些
赞一下(2人) 回复此楼
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
2楼2011-04-20 09:02:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
1949stone(金币+2): 鼓励 2011-04-20 10:45:50
引用回帖:
Originally posted by 111602 at 2011-04-20 09:14:00:
这个可未必，也看到好多人反映这个问题。不知道有实际做过的没有。

什么叫未必如此？
质粒一般有三种状态，线性质粒；开环的；超螺旋的；一般前以最快的是超螺旋，其次是开环的，然后才是线性的。
赞一下(2人) 回复此楼
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
4楼2011-04-20 10:05:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xuguanghai

木虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
Originally posted by 天使托 at 2011-04-20 10:05:43:
什么叫未必如此？
质粒一般有三种状态，线性质粒；开环的；超螺旋的；一般前以最快的是超螺旋，其次是开环的，然后才是线性的。

超螺旋>线形>开环,不是这个吗？
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2011-04-20 10:31:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xuguanghai

木虫 (职业作家)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
1949stone(金币+2): 貌似 2011-04-20 10:46:07
引用回帖:
Originally posted by 111602 at 2011-04-20 08:28:01:
最近在做实验过程中，遇到要将质粒先线性化，发现用酶切后电泳，与未酶切的质粒相比，跑的速度要快，不知是何原因，这些质粒都非空载，有些不理解，一般线性后跑的速度应该比超螺旋快才对啊。请高手指教！

酶切后跑得快，应该是质粒变成片段了，看你质粒以及酶的关系了，还有
超螺旋>线形>开环，
赞一下(2人) 回复此楼
6楼2011-04-20 10:34:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
dhd997(金币+2): 你是对的 2011-04-20 10:51:17
引用回帖:
Originally posted by xuguanghai at 2011-04-20 10:31:29:
超螺旋>线形>开环,不是这个吗？

http://zhidao.baidu.com/question/211352024.html
你觉得呢？超螺旋是跑的最快滴！
赞一下(2人) 回复此楼
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
7楼2011-04-20 10:37:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xuguanghai

木虫 (职业作家)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
dhd997(金币+2): 有理有据，欢迎交流 2011-04-20 10:51:34
引用回帖:
Originally posted by 天使托 at 2011-04-20 10:37:47:
http://zhidao.baidu.com/question/211352024.html
你觉得呢？超螺旋是跑的最快滴！

http://zhidao.baidu.com/question/217768279.html?an=0&si=1
赞一下(2人) 回复此楼
8楼2011-04-20 10:49:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xuguanghai

木虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
Originally posted by 天使托 at 2011-04-20 11:03:31:
此链接说的不无道理，首先明确的是超螺旋是跑的最快的，可是线性和环状相比谁快一点，个人还是认为开环的跑得快。。。

详情请参见
基因操作原理第六版（Principles of Gene Manipulation）
瞿礼嘉 顾红雅 ...

恩，谢谢，去看看
回复此楼
10楼2011-04-20 11:06:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 111602 的主题更新
241/3返回列表123下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 食品与营养（0955）271求调剂 +13 升格阿达 2026-04-12 13/650 2026-04-14 10:25 by DdDFef31
[考研] 生物学308分求调剂（一志愿华东师大）接受跨专业 +10 相信必会光芒万� 2026-04-13 10/500 2026-04-14 09:28 by 带壳的鸡蛋
[考研] 300分求调剂 （085501机械专硕，本科扬大） +9 xu@841019 2026-04-11 10/500 2026-04-14 08:48 by 木木mumu～
[考研] 机械工程313分找工科调剂 +4 双一流本科机械 2026-04-08 4/200 2026-04-14 07:32 by Abskk
[基金申请] RY：中国产出的科学垃圾论文，绝对数量和比例都世界第一 +3 zju2000 2026-04-14 4/200 2026-04-14 06:28 by sunjie8888
[考研] 一志愿西交机械专硕求调剂 +9 求上岸的小王 2026-04-10 9/450 2026-04-13 16:08 by jiangguiquan11
[考研] 考研二轮调剂 +10 故人?? 2026-04-09 10/500 2026-04-13 09:55 by szhize
[考研] 。 +10 李多米lee. 2026-04-12 11/550 2026-04-12 22:58 by yuyin1233
[考研] 0860004 求调剂 309分 +9 Yin DY 2026-04-08 9/450 2026-04-11 22:55 by dongdian1
[考研] 296求调剂 +14 汪！？！ 2026-04-08 15/750 2026-04-11 20:28 by dongdian1
[考研] 284求调剂 +11 archer.. 2026-04-09 12/600 2026-04-11 20:23 by 蓝云思雨
[考研] 11408。358求调剂 +3 TMYzds 2026-04-07 3/150 2026-04-11 17:10 by 氮气气气
[考研] 346，工科求调剂 +3 moser233 2026-04-09 3/150 2026-04-11 10:04 by zhq0425
[考研] 282，求调剂 +12 jggshjkkm 2026-04-09 14/700 2026-04-11 09:39 by 猪会飞
[考研] 调剂 +19 小张ZA 2026-04-10 20/1000 2026-04-10 22:08 by 猪会飞
[考研] 265求调剂 +12 风说她早忘了 2026-04-10 13/650 2026-04-10 18:56 by chemisry
[考研] 367求调剂 +10 hffQAQ 2026-04-09 10/500 2026-04-09 18:06 by lijunpoly
[考研] 材料工程322 +18 哈哈哈吼吼吼哈 2026-04-07 19/950 2026-04-09 10:44 by cymywx
[考研] 283电子信息求调剂 +4 三石WL 2026-04-08 4/200 2026-04-09 10:21 by wp06
[考研] 一志愿西南大学生物学学硕344 求生物学相关调剂/生物与医药 +7 超人不会飞@ 2026-04-08 7/350 2026-04-09 09:35 by gong120082
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭