24小时热门版块排行榜

返回列表

本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

111602

木虫 (著名写手)

应助: 34 (小学生)
金币: 4233.9
散金: 148
红花: 2
帖子: 1380
在线: 346.5小时
虫号: 58926
注册: 2005-02-25
专业: 植物遗传学

[交流] 线性化及完整的质粒电泳问题。已有8人参与

最近在做实验过程中，遇到要将质粒先线性化，发现用酶切后电泳，与未酶切的质粒相比，跑的速度要快，不知是何原因，这些质粒都非空载，有些不理解，一般线性后跑的速度应该比超螺旋快才对啊。请高手指教！

首先感谢各位的讨论和建议。但必须说明一点，这个质粒是重组的，而且选择的酶只有一个酶切位点，电泳用的是1% AGAROSE GEL. 120V 30MIN.并且可以肯定已经被线性化的了。因为后继实验如果没有被线性化是无法成功的。

大家的回答都是建立在理论分析基础上的。我也赞同这一理论，但不知道有没有真正做过这一实验的朋友，可能我的实验（电泳）出了问题，但希望有实践经验的朋友给点意见。

[ Last edited by 111602 on 2011-4-21 at 01:42 ]

回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

1楼 2011-04-20 08:28:01

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

xiaoweiwei121

荣誉版主 (文坛精英)

这潭水蓝的深邃

MolEPI: 5
应助: 18 (小学生)
贵宾: 39.097
金币: 106416
散金: 2773
红花: 197
沙发: 109
帖子: 35580
在线: 2157.8小时
虫号: 426591
注册: 2007-07-28
性别: MM
专业: 蛋白质组学
管辖: 虫友互识

★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
西瓜(金币+5, EPI+1): 太牛了！实践是检验真理的唯一标准哦！话说区长MM睡这么晚会长痘痘滴…… 2011-04-21 23:38:07

这个可不一定，也不要在什么情况下都说超螺旋跑的快，首先要搞清楚它为什么会跑的快，他有他的决定因素。并不是在任何情况下都是这样的。我们不是在比拼理论知识，而是为了解决我们试验中确实存在问题，我做过类似的
线性跑的比超螺旋要快
建议楼主换个0.7-0.8%胶跑一下看看（浓度一定要准哦），电压不用太高，看看结果如何，然后我们再来讨论
曾经看过一个解释：胶浓度小，则孔径大，超螺旋的跑的阻力小，就快些。而胶浓度大，则孔径小，超螺旋的跑的阻力大，就慢些。而线性片段的快慢与分子量有关，不受浓度的影响。超螺旋的速度是可以变化的，与胶浓度有关，与分子量无关。
超螺旋的速度还和凝胶中的EB有关系（如果你没加的，那就算了）

我的一个实验图片，哪个是酶切的，哪个是质粒对照楼主应该能看出来
胶的浓度大于1%

[ Last edited by xiaoweiwei121 on 2011-4-21 at 03:27 ]