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woaipan

铜虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 60.7
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在线: 13小时
虫号: 894791

[交流] 【求助】急！有木有做过Tricine－SDS－PAGE小分子蛋白电泳的进！

我最近在纯化蛋白，估计纯化得到的蛋白分子量挺小的，低于10kD，想用tricine－sds-page电泳跑一下看看，但是查了资料这种电泳需配置阴极和阳极两种电泳缓冲液，我照着说明配好了，现在不知道如何使用，具体怎么加到电泳槽中。以前做sds-page的时候只需要加一种电泳缓冲液，所以糊涂了。
注：文献中说是阳极电泳液加到底部，阴极的则加在上部。
亟待各位大虾的帮助和解决！

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电泳、bio-rad 电转化仪及操作

蛋白纯化

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1楼 2011-04-16 15:42:11

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protein780

铁虫 (小有名气)

应助: 9 (幼儿园)
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帖子: 135
在线: 61.1小时
虫号: 2024196

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖

引用回帖:

13楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-09-24 15:06:46
二楼的方法我也用过，可以很好的分离4kD的小蛋白。其实10kD的蛋白不一定用tricine胶。可以自己做个12-21%的梯度胶，或者胶里加加6M尿素。至于什么阳极阴极缓冲液，你只要把阴极缓冲液加在上槽（和胶的样品孔相连）， ...

你好，我用文献查到的方法配制了tricine胶，也配制了阴阳极缓冲液，并且按照要求的方法跑的，只是染胶的时候直接考染的，然后煮大概20分钟脱色，结果是10KD以下没有蛋白，好奇怪，菌液也是都没有，能帮忙分析下原因吗？