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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】抗性基因要表达，咋办？
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梦想起飞

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】抗性基因要表达，咋办？ 已有3人参与

最近又遇到一个问题，请求大家帮助！
我需要四环素抗性基因，已经在pBR322质粒上找到了，但是只找到ORF，就是从ATG到TAA的这一段。但是我的目的是想要这段基因表达，那就还需要上游的启动子啊，SD序列，还有下游的终止子这些元件。不知道该怎么找到这些元件呢。我觉得应该是在ATG的上游多扩增一段序列，可是不知道到底要多长？还有下游终止子序列，在TAA之后多远的地方呢？这些应该怎么确定啊？？极度迷茫中……
等待高手们解惑……
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1楼 2011-04-15 21:22:01
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梦想起飞

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 天使托 at 2011-04-15 23:04:25:
只需要有启动子就可以了。。。。正如楼上所说启动子在起始密码子上游几十BP处，你如果不放心可以往前面扩上100-200bp，完全可以的。。。

谢谢你的解答！小木虫好温暖哦……
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5楼2011-04-16 10:06:44
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郝钊

金虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
西瓜(金币+4): 鼓励 2011-04-16 00:01:01
PBR322质粒的全序列应该都有了吧？在这个质粒上四环素抗性基因上可以表达的，所以它的启动子元件是完整的。一般启动子序列在起始密码子上游几十个bp，你若是担心就扩增一百多bp好了，够用了。对于终止元件就不用考虑了，在序列内部，转录会在终止密码子处结束，即使不结束，翻译的时候遇到终止密码子，翻译也会结束。
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2楼2011-04-15 21:40:25
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
西瓜(金币+2): 热心的天使 2011-04-16 00:01:17
只需要有启动子就可以了。。。。正如楼上所说启动子在起始密码子上游几十BP处，你如果不放心可以往前面扩上100-200bp，完全可以的。。。
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Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
3楼2011-04-15 23:04:25
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梦想起飞

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 郝钊 at 2011-04-15 21:40:25:
PBR322质粒的全序列应该都有了吧？在这个质粒上四环素抗性基因上可以表达的，所以它的启动子元件是完整的。一般启动子序列在起始密码子上游几十个bp，你若是担心就扩增一百多bp好了，够用了。对于终止元件就不用考 ...

谢谢你的解答！小木虫好温暖哦……
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4楼2011-04-16 10:06:29
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