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梦想起飞

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】抗性基因要表达,咋办? 已有3人参与

最近又遇到一个问题,请求大家帮助!
我需要四环素抗性基因,已经在pBR322质粒上找到了,但是只找到ORF,就是从ATG到TAA的这一段。但是我的目的是想要这段基因表达,那就还需要上游的启动子啊,SD序列,还有下游的终止子这些元件。不知道该怎么找到这些元件呢。我觉得应该是在ATG的上游多扩增一段序列,可是不知道到底要多长?还有下游终止子序列,在TAA之后多远的地方呢?这些应该怎么确定啊??极度迷茫中……
等待高手们解惑……
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梦想起飞

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by 天使托 at 2011-04-15 23:04:25:
只需要有启动子就可以了。。。。正如楼上所说启动子在起始密码子上游几十BP处,你如果不放心可以往前面扩上100-200bp,完全可以的。。。

谢谢你的解答!小木虫好温暖哦……
5楼2011-04-16 10:06:44
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郝钊

金虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
西瓜(金币+4): 鼓励 2011-04-16 00:01:01
PBR322质粒的全序列应该都有了吧?在这个质粒上四环素抗性基因上可以表达的,所以它的启动子元件是完整的。一般启动子序列在起始密码子上游几十个bp,你若是担心就扩增一百多bp好了,够用了。对于终止元件就不用考虑了,在序列内部,转录会在终止密码子处结束,即使不结束,翻译的时候遇到终止密码子,翻译也会结束。
2楼2011-04-15 21:40:25
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
西瓜(金币+2): 热心的天使 2011-04-16 00:01:17
只需要有启动子就可以了。。。。正如楼上所说启动子在起始密码子上游几十BP处,你如果不放心可以往前面扩上100-200bp,完全可以的。。。
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
3楼2011-04-15 23:04:25
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梦想起飞

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by 郝钊 at 2011-04-15 21:40:25:
PBR322质粒的全序列应该都有了吧?在这个质粒上四环素抗性基因上可以表达的,所以它的启动子元件是完整的。一般启动子序列在起始密码子上游几十个bp,你若是担心就扩增一百多bp好了,够用了。对于终止元件就不用考 ...

谢谢你的解答!小木虫好温暖哦……
4楼2011-04-16 10:06:29
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