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梦想起飞

铜虫 (小有名气)

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[交流] 【求助/交流】抗性基因要表达，咋办？已有3人参与

最近又遇到一个问题，请求大家帮助！
我需要四环素抗性基因，已经在pBR322质粒上找到了，但是只找到ORF，就是从ATG到TAA的这一段。但是我的目的是想要这段基因表达，那就还需要上游的启动子啊，SD序列，还有下游的终止子这些元件。不知道该怎么找到这些元件呢。我觉得应该是在ATG的上游多扩增一段序列，可是不知道到底要多长？还有下游终止子序列，在TAA之后多远的地方呢？这些应该怎么确定啊？？极度迷茫中……
等待高手们解惑……

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1楼 2011-04-15 21:22:01

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郝钊

金虫 (小有名气)

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西瓜(金币+4): 鼓励 2011-04-16 00:01:01

PBR322质粒的全序列应该都有了吧？在这个质粒上四环素抗性基因上可以表达的，所以它的启动子元件是完整的。一般启动子序列在起始密码子上游几十个bp，你若是担心就扩增一百多bp好了，够用了。对于终止元件就不用考虑了，在序列内部，转录会在终止密码子处结束，即使不结束，翻译的时候遇到终止密码子，翻译也会结束。

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