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hkfgwww

银虫 (正式写手)

[求助] 枯草芽孢杆菌抗性基因的反敲除

枯草芽孢杆菌抗性基因的反敲除


枯草芽孢杆菌敲除了一个基因,用PUC19作为母体构建同源片段做的,为了筛选带上了红霉素抗性基因,如何反敲除掉红霉素基因呢?

在谷棒内可用sacB,枯草不能用啊,郁闷!
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微生物发酵
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yguang

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

hkfgwww(金币+4): 2011-05-17 16:42:11
你可以借鉴一下Red同源重组,现在红霉素抗性基因两端加上FLP,然后再利用FLP去除红霉素抗性基因。
2楼2011-05-17 13:42:39
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hkfgwww

银虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by yguang at 2011-05-17 13:42:39:
你可以借鉴一下Red同源重组,现在红霉素抗性基因两端加上FLP,然后再利用FLP去除红霉素抗性基因。

这个你试过吗?因为red重组效率很高,而枯草的转化效率和重组效率很低的。

还有这个理论上可行吗?red重组不太懂。
微生物发酵
3楼2011-05-17 16:43:21
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yguang

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

hkfgwww(金币+1): 2011-05-24 08:15:09
hkfgwww(金币+15): 2011-06-03 08:58:48
不是让你做Red,你可以还用质粒转化进行同源重组,只是在抗性标记两端加上FLP而已!
4楼2011-05-17 20:38:42
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285459331

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by yguang at 2011-05-17 20:38:42:
不是让你做Red,你可以还用质粒转化进行同源重组,只是在抗性标记两端加上FLP而已!

也可以用一些反抗性标记,这方面文章不少,南京农业大学就有做的。
生命不止,奋斗不息
5楼2011-06-03 08:56:59
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