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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 枯草芽孢杆菌抗性基因的反敲除
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hkfgwww

银虫 (正式写手)

[求助] 枯草芽孢杆菌抗性基因的反敲除

枯草芽孢杆菌抗性基因的反敲除


枯草芽孢杆菌敲除了一个基因，用PUC19作为母体构建同源片段做的，为了筛选带上了红霉素抗性基因，如何反敲除掉红霉素基因呢？

在谷棒内可用sacB，枯草不能用啊，郁闷！
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微生物发酵
1楼 2011-05-17 10:42:18
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hkfgwww

银虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by yguang at 2011-05-17 13:42:39:
你可以借鉴一下Red同源重组，现在红霉素抗性基因两端加上FLP，然后再利用FLP去除红霉素抗性基因。

这个你试过吗？因为red重组效率很高，而枯草的转化效率和重组效率很低的。

还有这个理论上可行吗？red重组不太懂。
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微生物发酵
3楼2011-05-17 16:43:21
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yguang

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

hkfgwww(金币+4): 2011-05-17 16:42:11
你可以借鉴一下Red同源重组，现在红霉素抗性基因两端加上FLP，然后再利用FLP去除红霉素抗性基因。
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2楼2011-05-17 13:42:39
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yguang

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

hkfgwww(金币+1): 2011-05-24 08:15:09
hkfgwww(金币+15): 2011-06-03 08:58:48
不是让你做Red，你可以还用质粒转化进行同源重组，只是在抗性标记两端加上FLP而已！
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4楼2011-05-17 20:38:42
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285459331

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by yguang at 2011-05-17 20:38:42:
不是让你做Red，你可以还用质粒转化进行同源重组，只是在抗性标记两端加上FLP而已！

也可以用一些反抗性标记，这方面文章不少，南京农业大学就有做的。
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生命不止，奋斗不息
5楼2011-06-03 08:56:59
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