应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】以DNA为模板做PCR这么难！
141/2返回列表12下一页
查看: 1826  |  回复: 13
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看

nnsulei

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】以DNA为模板做PCR这么难！ 已有9人参与

小弟通过RACE获得了CDNA全长，想分析其在基因组水平的内含子，但是以DNA为模板怎么都P不出来。郁闷啊。延伸时间都达到7分钟了还没有，DNA提的感觉也可以了，请高人指点!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
努力做就有结果～
1楼 2011-04-10 12:46:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nnsulei

金虫 (正式写手)
凡是能提供有效帮助的，本人必追加悬赏！！！
赞一下 回复此楼
努力做就有结果～
2楼2011-04-10 12:48:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaohq1209

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+2): 鼓励发帖交流。 2011-04-10 19:08:25
引用回帖:
Originally posted by nnsulei at 2011-04-10 12:46:58:
小弟通过RACE获得了CDNA全长，想分析其在基因组水平的内含子，但是以DNA为模板怎么都P不出来。郁闷啊。延伸时间都达到7分钟了还没有，DNA提的感觉也可以了，请高人指点!

延伸时间长了并不总是有效果。不知lz是否了解整个基因的长度？

以前我扩增6k的片段，用LA taq，4min以内的延伸时间就足够了。
赞一下(2人) 回复此楼
我有一个梦想，我梦想有一天，我们的人民可以根据自己的意愿与消费能力，居住在自己愿意居住的地方。
3楼2011-04-10 13:10:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nnsulei

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by zhaohq1209 at 2011-04-10 13:10:19:
延伸时间长了并不总是有效果。不知lz是否了解整个基因的长度？

以前我扩增6k的片段，用LA taq，4min以内的延伸时间就足够了。

我的基因在其他物种里含内含子一般就5，6KB，我延伸时间逐渐加长的，就是没结果。
赞一下 回复此楼
努力做就有结果～
4楼2011-04-10 15:09:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaohq1209

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+1, EPI+1): 鼓励发帖交流。 2011-04-10 19:08:37
引用回帖:
Originally posted by nnsulei at 2011-04-10 15:09:55:
我的基因在其他物种里含内含子一般就5，6KB，我延伸时间逐渐加长的，就是没结果。

用LA taq扩增4min以内足够了。以前有个师兄的经验，他的片段也很大，延伸时间快10min了还扩不出来，最后发现不是延伸时间的原因。

以前也遇见过PCR总是阴性的情况，虽然没找到原因，但把所有的PCR成分更换以后就可以了。不知lz PCR有没有加相应的对照？

[ Last edited by zhaohq1209 on 2011-4-10 at 15:51 ]
赞一下(2人) 回复此楼
我有一个梦想，我梦想有一天，我们的人民可以根据自己的意愿与消费能力，居住在自己愿意居住的地方。
5楼2011-04-10 15:49:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shizishanshang

至尊木虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
很好扩啊,我CDNA5'费老劲了
DNA全长一下就扩出来了
用了两对引物都扩出来了
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2011-04-10 15:54:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
把退火温度降低5℃试试吧。
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2011-04-10 16:55:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wqj1988926

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
可能是引物不合适，没有特异性
赞一下(1人) 回复此楼
风雪夜归人
8楼2011-04-11 12:50:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

td0605

木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
西瓜(金币+3): 鼓励交流实践经验 2011-04-11 16:07:58
我之前扩基因组时，模板加多了，扩出来很多杂带，几乎是一片弥散，后来减小了模板量，稍稍提高了退火温度，还是扩出来4条带，汗！心一横，全部回收了测序，还好，其中一条就是我需要的。
赞一下(2人) 回复此楼
9楼2011-04-11 15:13:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

charchy

铁虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我也有出现过从DNA扩增片段失败的，会不会是你的片段GC含量太高了，你换GC buffer试一下
赞一下(1人) 回复此楼
10楼2011-04-11 20:50:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 nnsulei 的主题更新
141/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 情人节自我反思：在爱情中有过遗憾吗？ +5 瞬息宇宙 2026-02-15 6/300 2026-02-18 12:51 by 月下雪林
[找工作] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +3 i3cz6qj6l2 2026-02-17 3/150 2026-02-18 11:09 by lqtl9djx19
[考博] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +3 i3cz6qj6l2 2026-02-17 3/150 2026-02-18 10:54 by lqtl9djx19
[考研] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +3 i3cz6qj6l2 2026-02-17 3/150 2026-02-18 10:39 by lqtl9djx19
[考研] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +3 pnpwoqbg8f 2026-02-17 3/150 2026-02-18 08:53 by lqtl9djx19
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +3 pnpwoqbg8f 2026-02-17 3/150 2026-02-18 08:38 by lqtl9djx19
[找工作] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +4 pnpwoqbg8f 2026-02-17 4/200 2026-02-18 07:55 by lotyj5cz79
[基金申请] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +3 pnpwoqbg8f 2026-02-16 4/200 2026-02-18 07:40 by lotyj5cz79
[考研] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +4 pnpwoqbg8f 2026-02-16 4/200 2026-02-18 07:38 by lotyj5cz79
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +4 pnpwoqbg8f 2026-02-16 4/200 2026-02-18 07:23 by lotyj5cz79
[论文投稿] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +4 pnpwoqbg8f 2026-02-16 4/200 2026-02-18 07:08 by lotyj5cz79
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +3 pnpwoqbg8f 2026-02-16 3/150 2026-02-18 06:53 by lotyj5cz79
[论文投稿] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +3 pnpwoqbg8f 2026-02-17 3/150 2026-02-18 00:40 by tk2gfblvuz
[找工作] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +3 pnpwoqbg8f 2026-02-17 4/200 2026-02-18 00:23 by tk2gfblvuz
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8 O5 51O 54,科目齐全,可+急 +3 pnpwoqbg8f 2026-02-17 3/150 2026-02-17 23:40 by tk2gfblvuz
[基金申请] 基金正文30页指的是报告正文还是整个申请书 +3 successhe 2026-02-16 4/200 2026-02-17 20:56 by successhe
[基金申请] 今年春晚有几个节目很不错，点赞！ +5 瞬息宇宙 2026-02-16 6/300 2026-02-17 12:49 by jymy19840415
[微米和纳米] 球磨粉体时遇到了大的问题，请指教！ 10+3 6sbiam 2026-02-12 15/750 2026-02-16 15:03 by tgzxzqj
[基金申请] 过年走亲戚时感受到了所开私家车的鄙视链 +3 瞬息宇宙 2026-02-15 5/250 2026-02-16 14:23 by aspect3000
[硕博家园] 江汉大学解明教授课题组招博士研究生/博士后 +3 cleverlyy 2026-02-12 3/150 2026-02-12 21:02 by qsdf1
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭