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yhy322

铁虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】引物特异性PCR(SSP-PCR)检测SNP,是不是容易出现杂带呀已有6人参与

用引物特异性PCR检测单点突变,下游引物一样,上游引物只差一个碱基。分别在两个体系(体系1和体系2)中进行PCR,我觉得结果应该是纯合子只有在体系1或体系2二者之一中有条带,杂合子两个体系都有带,且为同样亮度的。
    但为什么我的结果总会是在一个体系中有清晰条带,另一体系中也有模糊条带。是不是这种方法容易出现这种情况,可不可以认为只要不是同等亮度的都可判断为纯合型?
    请各位大侠指教!非常感谢!
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yj-lzx

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dhd997(金币+6): 跑的还不错了 2011-04-09 08:44:26
这个的话,你的引物设计的要给力啊~~~
我最近用的方法跟楼主的也差不多~~~
不过有的也不好判啊~~~
那些不清楚的不晓得是不是杂带


[ Last edited by yj-lzx on 2011-4-8 at 13:42 ]
曾经的你/以为只要带着那把青春的长剑和赤子的良心就可以说服自己不出卖理想的灵魂/在最寂寞和不得不流泪的晚上/即使连自己都在笑自己傻/依然拔出怀中的长剑~~~
6楼2011-04-08 13:41:06
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yj-lzx

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对了~~~
我的是两对引物在一个反应体系中~~~
touch down pcr~~~
曾经的你/以为只要带着那把青春的长剑和赤子的良心就可以说服自己不出卖理想的灵魂/在最寂寞和不得不流泪的晚上/即使连自己都在笑自己傻/依然拔出怀中的长剑~~~
7楼2011-04-08 13:44:23
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yj-lzx

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dhd997(金币+2): 啊,没想到啊,现在搞专业了。欢迎继续! 2011-04-09 08:45:11
引用回帖:
Originally posted by Starring at 2011-04-08 19:14:09:
这个问题很难说啊。我咨询过好多人,都觉得那种别太清楚的也算是P出来东西啦

那就是杂带咯~~~或者说引物还是不行,分辨变粗出来
曾经的你/以为只要带着那把青春的长剑和赤子的良心就可以说服自己不出卖理想的灵魂/在最寂寞和不得不流泪的晚上/即使连自己都在笑自己傻/依然拔出怀中的长剑~~~
10楼2011-04-08 20:33:43
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