应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】关于PCR的模板问题
51/1返回列表
查看: 1141  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

30937747

木虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】关于PCR的模板问题

我将一段PCR得到的Kan基因连接至puc19上，然后用同一对引物，同样的条件，以我构建好的puc19-Kan质粒作为模板，想再一次的扩增Kan基因，却怎么也扩增不出来。酶切鉴定我的puc19-Kan已经成功构建。而且我通过酶切把Kan片段回收作为模板PCR，又能P出目的条带。

我想问的是，为什么同样的引物同样的条件，在我构建的质粒上就P不出来东西，而且我试了温度梯度和模板浓度梯度，但是在片段上就能P出来？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2011-04-05 23:37:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

世外清风

铁杆木虫 (职业作家)
30937747(金币+2): 本来已经联系测序了。但是片段又P出来了。就证明没有问题.就没有测了 2011-04-06 10:07:29
楼主先测下序继续确认一下吧，如确认再换换引物扩下试试？
赞一下 回复此楼
4楼2011-04-06 08:44:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答

wzwhq

铁虫 (小有名气)
我也遇到了相同的情况，郁闷。。。怎么回事啊？
赞一下 回复此楼
2楼2011-04-06 08:21:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

amilie030312

金虫 (正式写手)
30937747(金币+1): 质粒我检测过了,没有什么问题.puc19也应该不会对GC含量有太大影响 2011-04-06 14:48:52
首先看质粒是否被不纯的内切酶切掉了一部分，没办法和引物序列匹配了，测序就知道结果了，其次看一下加上质粒之后扩增的酶是否有能力扩增那么长的片段或者加上质粒之后是否GC含量有了很大变化，扩增酶是否是耐受高GC的。
赞一下 回复此楼
5楼2011-04-06 12:56:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
简单回复
yuhongquan78083楼
2011-04-06 08:32   回复  
查看全部 5 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭