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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 动植物 » 综合其他 » 【求助/交流】超薄切片中，植物亚细胞中的重金属固定问题
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xupeixian

木虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】超薄切片中，植物亚细胞中的重金属固定问题

打算做透射电子显微镜（TEM），观察植物亚细胞中重金属镉（Cd）的分布状态，看了一些相关文献，有以下几点困惑，希望得到大家的帮助：
1.Cd在植物亚细胞中会不会渗出？
2.文献讲用Na2S固定，这种方法可靠吗？
3.植物中已经存在重金属了，做TEM时还要再用柠檬酸铅之类的染色吗？
4.有谁实验室比较擅长做这方面的？
恳请帮助。
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1楼 2011-03-30 11:00:11
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xupeixian

木虫 (小有名气)
好的，谢谢你的中肯建议。
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5楼2011-04-07 12:50:01
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champion555

捐助贵宾 (正式写手)
★
xupeixian(金币+5):谢谢参与
xupeixian(金币+10): 2011-04-06 17:22:28
小虫做TEM，提供些参考意见，讲的不对的还请指教：
1、Cd在植物亚细胞中会不会渗出。植物组织是切成1~3mm³的小块，在进行超薄切片的时候还要修包埋块，一般都是看块中间的，lz只要在取样的时候小心些就是，不要切到感兴趣的部位。

2、Na2S固定我没用过。植物组织固定分前固定和后固定，前固定都是用2.5%的戊二醛，后固定用1%锇酸。当然也有其他的一些多重固定方法，视样品材料而定，lz可以去搜一下，很多的。

3、植物TEM必须要用柠檬酸铅和醋酸双氧铀双重的染色的，因为超薄切片太薄，在电镜下的反差弱，需要染色来加强反差。

祝lz实验成功！
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2楼2011-04-05 07:48:13
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xupeixian

木虫 (小有名气)
首先，我要谢谢你，等待了这么多天，终于有回复的了。
      Na2S固定，主要是在戊二醛固定后，来使Cd离子沉淀用的，生成CdS颗粒，在TEM中就会观察到黑色颗粒。但是这种方法是否可靠，不得而知。因为饿酸后固定后，细胞中的脂肪粒等等会形成黑色的颗粒吗？到底哪些黑色颗粒是重金属呢？这个有点疑问。
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3楼2011-04-06 17:28:20
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champion555

捐助贵宾 (正式写手)
★
xupeixian(金币+5):谢谢参与
引用回帖:
Originally posted by xupeixian at 2011-04-06 17:28:20:
首先，我要谢谢你，等待了这么多天，终于有回复的了。
      Na2S固定，主要是在戊二醛固定后，来使Cd离子沉淀用的，生成CdS颗粒，在TEM中就会观察到黑色颗粒。但是这种方法是否可靠，不得而知。因为饿酸后固定后 ...

呵呵，最近没怎么上小木虫，所以到现在才看到。

你可以试一试这个方法。切片中的黑色颗粒是肯定存在的。我建议CdS颗粒在片子上的粒径大小要搞清楚，这样即使片子上有些污染了也可以根据CdS的粒径来分析。
还有就是铀-铅染色的时候要小心一点，不能有铅污染。
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4楼2011-04-07 11:43:24
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